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归海逸凌

新虫 (初入文坛)

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[求助] 融合蛋白标签切除遇到问题已有1人参与

小弟最近在做一个融合蛋白的标签切除，融合蛋白的可溶性、表达量都还不错，可是在切除标签的过程遇到了问题。如图所示，融合蛋白在切除过程中出现浑浊（酶切之前13000g离心10分钟，0.22μm过滤），离心后SDS-PAGE检测发现，目标蛋白（最小的条带对应12kDa）和融合蛋白一起沉淀了下去，而上清中存在着三种成分（其他的暂且不考虑）。后来又增加酶量，目标蛋白（最小的条带对应12kDa）和融合蛋白还是一起沉淀了下去。希望有经验的同行们分享一下经验，在下感激不尽。

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TEV酶切体系中是否可以加尿素已经有2人回复

1楼 2016-11-21 17:17:07

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ztt2015

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

1楼: Originally posted by 归海逸凌 at 2016-11-21 17:17:07
小弟最近在做一个融合蛋白的标签切除，融合蛋白的可溶性、表达量都还不错，可是在切除标签的过程遇到了问题。如图所示，融合蛋白在切除过程中出现浑浊（酶切之前13000g离心10分钟，0.22μm过滤），离心后SDS-PAGE检 ...

目标蛋白性质不稳定容易沉，加甘油或其它保护剂试试。这也没什么好办法解决。

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