| 查看: 3047 | 回复: 9 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者意萧02将赠送您 15 个金币 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
酵母双杂交实验与pull down实验求助已有1人参与
|
||
|
大家好，小弟在做蛋白互作过程中碰到一些问题，特别向虫友们求助一下，实验材料是水稻的一个基因：具体如下： （1）我在做酵母双杂交的时候第一次在4缺板上互作得到一个酵母菌斑，并且用T7和AD的引物直接就扩到了基因，而第二次再筛库一次验证的时候，4缺板上得到了比较多的菌，当然有可能有同样的菌存在，但是这次跟上次一样去扩增，就是无法得到该基因，请帮我分析下可能有什么原因导致的问题？实验室师姐建议提取该酵母质粒，转化大肠再扩增测序，主要是菌斑上百个，请问是否可行？ （2）pull down实验，我起先用pGEX-6p-1这个GST标签载体构建，发现基本在沉淀中，这样是无法过柱纯化的，然后我又用了HIS标签的pET28a，pET32a，也是如此，最后有很多人说试试pMAL载体，我想购买了这个载体，但是发现可以买到pMAL-C5X和pMAL-P5X这两个载体，请问这两个载体，一个在胞质表达的蛋白，一个是能穿越质膜表达的蛋白有什么区别吗？（note：我的蛋白亚细胞定位位于膜上）。最后有没有谁用过的蛋白可以尽可能使蛋白溶于上清的。求推荐，谢谢各位虫友，求解答。 （如果能帮到我，必有更多金币回报，谢谢大家）@飞约疯人院@wizardfan@biostar2009 |
回复此楼» 猜你喜欢
球磨分散剂
已经有4人回复
-
阴阳离子交换剂！！！！
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有50人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酸接酚羟基，
已经有11人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酰氯
已经有10人回复
-
酸酐或者羧酸酰氯化
已经有15人回复
-
酚羟基接入磷酸，磷酸酯化
已经有26人回复
-
土壤中可溶性有机碳种类
已经有1人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
7楼2016-11-27 13:20:23
Neo2000
木虫 (著名写手)
- 应助: 639 (博士)
- 金币: 8720.2
- 红花: 37
- 帖子: 1700
- 在线: 269.3小时
- 虫号: 322365
- 注册: 2007-03-11
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2016-11-17 15:01:36
3楼2016-11-17 15:17:20
4楼2016-11-25 22:31:43
5