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求助，请教血浆样品处理与测定
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血浆样品的处理与测定 取血浆200μl , 加10 %高氯酸溶液100μl ,漩涡混匀,10 000 r·min - 1离心5 min ,取上清液100μl ,加入NaOH 溶液50μl , 漩涡混匀30 s 后, 加入衍生化试液OPA100μl ,漩涡混匀,置暗处放置10 min ,吸取20μl 进样, 按上述条件测定,记录色谱图和GSH 衍生物峰面积A。 小弟刚进实验室，刚开始做血浆处理测定实验，看到有篇论文，如上： 有些疑问，麻烦大侠们不吝赐教; 谢谢 麻烦请教下关于上面的处理方法： 1，200，100μl一般用什么取液器取啊 2，10 %高氯酸溶液蛋白沉淀，是不是浓度太高，PH会不会太低了，伤柱子啊（我的是一般性柱子） 3，离心时转速是不是可以再高点，时间相应少点，如转速改为40 000 r·min - 1；另外转速大后会不会破坏上清液中成分啊； 4，取上清液，加入NaOH 溶液50μl ，NaOH 溶液浓度多少，其目的是为了中和上清液中多余酸，使达到适宜进样PH吗 5，加入衍生化溶液后，为什么要暗处放置呢，我的也是用衍生化方法测定谷胱甘肽 另外，空白血浆指不加衍生化试剂的吗 谢谢了，问题有点多，由于小弟原来不是做这个的，好多不懂，还请见谅，还请不吝赐教，谢谢各位了 |
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我的看法是这样的： 1，200，100μl一般用移液枪比较方便，国产的还是进口的你可以根据实验要求和经费情况自己选择 2，我们做血浆样本时10 %高氯酸溶液蛋白沉淀，然后要调pH值的，当然你可以试验一下加入NaOH的量，以后不用每管都调pH的，加固定量就好 3，离心时转速我们一般就用16000rpm的，效果不错啊，转速的影响没有考察过，但是离心机比较容易发热，如果你的药热不稳定的话要注意； 4，NaOH 溶液浓度和用量第2点已经说了 5，加入衍生化溶液后，要暗处放置应该是因为这个衍生化试剂或衍生化反应发生的条件需要避光，你可以多看看用OPA的文献，这个试剂应该比较成熟了 另外，空白血浆应该不是指不加衍生化试剂，而是除了不加药物，其他试剂和处理方法都和含药血浆一样，如果不加衍生化试剂怎么知道衍生化试剂对样品峰有没有干扰呢？ 以上为个人意见，欢迎讨论 |
4楼2008-12-03 10:03:27
