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tiramisu4869新虫 (初入文坛)
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[交流]
大提摇菌中的两个问题
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1.第一次摇菌时本小白弄错了步骤，结果是这样做的：把质粒快转(10ul感受态转10ng10质粒，热激10s)之后，加了1ml无抗(无抗的！)培养基，摇了12h，然后将这1ml菌液加到100ml含amp的LB液体培养基中，摇12h，质粒大提，结果500ul得到浓度为870ng/ul，现在要用来做细胞转染，但是因为用无抗培养基摇了一晚，不知道提出的质粒会不会有问题。 ps：DH5α本身有没有质粒，会不会我提出来的是它自身的质粒 2.另外一个质粒小提时浓度132ng/ul，测序公司说测不出来，所以用测序引物，高保真酶扩增后送pcr产物测序，测得结果正确。于是把质粒快转(10ng质粒10ul感受态，热激10s，100ul无抗培养基，不复苏直接涂板)，12h后挑平板上的单克隆到3ml ampLB培养基中，摇12h，然后取1ml到100ml ampLB培养基中摇12h，结果培养基中有絮状物，离心后发现菌体很少很少，请问是我的操作步骤有问题，还是可能存在污染?这和我一开始的质粒公司说质量不好测不出序有关系吗? 小白研一一只，求大神悉心解答，谢谢各位 发自小木虫Android客户端 |
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tiramisu4869
新虫 (初入文坛)
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- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
2楼2016-11-16 16:47:51
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