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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 载体构建
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spiderboy

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主，PBI121的载体，我用过，很大14K，不好做。。
首先要保证你的片段能够扩出来，然后切胶回收你的片段。出现引物二聚体的话，你可以尝试降低退火温度，或用TOUCHDOWN PCR来扩片段。
然后把回收的片段做平连或者做TA连接。
然后做亚克隆，把你的片段从平连的载体或T载体上切下来，连到PBI121上，这个时候片段和载体的摩尔比最好是10比1以上。。
你可以把详细的情况说下，我可以帮你重新设计下试验
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11楼2009-08-30 09:50:50
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381466632

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
还是要摸条件的，有点耐心呀。祝你成功
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12楼2009-09-03 11:23:29
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者
告诉你个笨办法。你弄多点产物。然后乙醇沉淀后再来用。（目的：提高目的片段的量）
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13楼2009-09-03 13:16:27
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
片段600多应该不难连的
首先PCR,产物胶回收后酶切，然后再回收，注意跑胶看看回收效果，连接后转化扩大培养后提质粒，做电泳和酶切鉴定
不是连接后直接跑胶，载体和片段浓度是有一定比例的 怎么判断连接效果啊
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14楼2009-09-03 15:42:39
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tonme

禁言 (小有名气)
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15楼2009-09-15 12:11:39
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者
提高目的片段浓度。。就用乙醇沉淀！
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16楼2009-09-15 12:29:56
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