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spiderboy

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼主,PBI121的载体,我用过,很大14K,不好做。。
首先要保证你的片段能够扩出来,然后切胶回收你的片段。出现引物二聚体的话,你可以尝试降低退火温度,或用TOUCHDOWN PCR来扩片段。
然后把回收的片段做平连或者做TA连接。
然后做亚克隆,把你的片段从平连的载体或T载体上切下来,连到PBI121上,这个时候片段和载体的摩尔比最好是10比1以上。。
你可以把详细的情况说下,我可以帮你重新设计下试验
11楼2009-08-30 09:50:50
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381466632

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
还是要摸条件的,有点耐心呀。祝你成功
12楼2009-09-03 11:23:29
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者

告诉你个笨办法。你弄多点产物。然后乙醇沉淀后再来用。(目的:提高目的片段的量)
13楼2009-09-03 13:16:27
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bioxixi

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
片段600多应该不难连的
首先PCR,产物胶回收后酶切,然后再回收,注意跑胶看看回收效果,连接后转化扩大培养后提质粒,做电泳和酶切鉴定
不是连接后直接跑胶,载体和片段浓度是有一定比例的 怎么判断连接效果啊
14楼2009-09-03 15:42:39
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tonme

禁言 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

15楼2009-09-15 12:11:39
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者

提高目的片段浓度。。就用乙醇沉淀!
16楼2009-09-15 12:29:56
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