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xiaoliaosc

银虫 (小有名气)

[求助] 求助:5KB DNA 序列扩增 ,GC含量65% 已有2人参与

用高保真酶扩增,有目的条带,结果测序结果就是双峰,重复了很多此,换了很多引物,结果要么没有测序信号,要么就是结果双蜂。 对于这样的片段该怎么办?求指导, 谢谢!
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lingxfqibebt

木虫 (正式写手)

能扩增,主要是引物问题估计,重新设计引物,提高退火温度

发自小木虫Android客户端
3楼2016-11-14 22:16:34
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普通回帖

baichi121234

禁虫 (职业作家)

本帖内容被屏蔽

2楼2016-11-14 20:22:32
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yakun123

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
1楼: Originally posted by xiaoliaosc at 2016-11-14 19:44:59
用高保真酶扩增,有目的条带,结果测序结果就是双峰,重复了很多此,换了很多引物,结果要么没有测序信号,要么就是结果双蜂。 对于这样的片段该怎么办?求指导, 谢谢!

双峰是什么意思,不是很懂

发自小木虫Android客户端
4楼2016-11-14 22:20:52
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lemonvivi

新虫 (小有名气)

5楼2016-11-14 22:56:25
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kshdd

金虫 (著名写手)

6楼2016-11-15 00:38:06
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)


kodfx试试吧,另外引物优化一下

发自小木虫Android客户端
7楼2016-11-15 22:16:14
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
双峰极有可能是你送去测序的质粒被污染了,或者是你连上的质粒存在正反问题,你可以重新转化挑点,提质粒后测序
···
8楼2016-11-16 08:43:27
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lishuaiguang

新虫 (初入文坛)

9楼2016-11-16 10:05:01
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是测的pcr产物?这么长的序列建议你连了克隆载体再测序把
10楼2016-11-16 10:44:21
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