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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助：5KB DNA 序列扩增 ，GC含量65%
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xiaoliaosc

银虫 (小有名气)

[求助] 求助：5KB DNA 序列扩增 ，GC含量65% 已有2人参与

用高保真酶扩增，有目的条带，结果测序结果就是双峰，重复了很多此，换了很多引物，结果要么没有测序信号，要么就是结果双蜂。 对于这样的片段该怎么办？求指导， 谢谢！
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1楼 2016-11-14 19:44:59
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lingxfqibebt

木虫 (正式写手)
能扩增，主要是引物问题估计，重新设计引物，提高退火温度

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3楼2016-11-14 22:16:34
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baichi121234

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽
2楼2016-11-14 20:22:32
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yakun123

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
1楼: Originally posted by xiaoliaosc at 2016-11-14 19:44:59
用高保真酶扩增，有目的条带，结果测序结果就是双峰，重复了很多此，换了很多引物，结果要么没有测序信号，要么就是结果双蜂。 对于这样的片段该怎么办？求指导， 谢谢！

双峰是什么意思，不是很懂

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4楼2016-11-14 22:20:52
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lemonvivi

新虫 (小有名气)
是不是染菌了

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5楼2016-11-14 22:56:25
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kshdd

金虫 (著名写手)
建议克隆测序

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6楼2016-11-15 00:38:06
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
kodfx试试吧，另外引物优化一下

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7楼2016-11-15 22:16:14
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
双峰极有可能是你送去测序的质粒被污染了，或者是你连上的质粒存在正反问题，你可以重新转化挑点，提质粒后测序
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···
8楼2016-11-16 08:43:27
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lishuaiguang

新虫 (初入文坛)
酶的保真性不好？

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9楼2016-11-16 10:05:01
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是测的pcr产物？这么长的序列建议你连了克隆载体再测序把
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10楼2016-11-16 10:44:21
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