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0.75mol LÄûÃÊËáÄÆ N-Ô¹𼡰±Ëá(N-lauroyl sarcosine) ÁòÇèËáëÒ»º³åÒº ³éÌỺ³åÒº ÂÈ·Â ÒìÎì´¼ 2mol LÒÒËáÄÆ ËáÐÔ±½·Ó ÒìÄÚ´¼ ÒÒ´¼ 2mol LÒÒËá¼Ø 10mol L LiCl TNE»º³åÒº TE»º³åÒº Òºµª
ÒÇÆ÷¡¢ºÄ²Ä
Ñв§ºÍÑÐèÆ ÀëÐÄ»ú ²£Á§ Pasteur ÎüÁ¿¹Ü
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Ò» ²ÄÁÏÓëÉ豸
1)0.75mol/L ÄûÃÊËáÄÆ£¬pH7.0(º¬ÄûÃÊËᣩ, Óà 0.1�PC ´¦Àí²¢¸ßѹÃð¾ú
2)10%(m/V)N-Ô¹𼡰±Ëá (N-lauroyl sarcosine)
3) ÁòÇèËáëÒ»º³åÒº£ºÓà 293 ml ÎÞ¾úÈ¥Àë×ÓË®£¬17.6 ml0.75mol/L ÄûÃÊËáÄÆ,26.4m Ø 10%N-Ê®¶þ´¼¼¡°±ËáÄÆ£¬ÔÚ³§¼ÒÒ©Æ¿ÄÚÓÚÈܽâ 250 g ÁòÇèËáëÒ (²»ÓóÆÖØ)
4) ³éÌỺ³åÒº£ºÃ¿ 5 ml ÁòÇèËáëÒ»º³åÒº¼Ó 36ul ÛÏ»ùÒÒ´¼¡£Èô±»ÌáÈ¡µÄ×éÖ¯Öꬶà¾Û±½·Ó£¬³éÌỺ³åÒºÖÐÔò¿É¼ÓÈë¾ÛÒÒÏ©¾ÛßÁ¿©Íéͪ (polyvinypoiypyrrolidone)(20%£¬m/m)
5) Âȷ£ºÒìÎì´¼ 49:1(V/V)
6)2mol/L ÒÒËáÄÆ£¬¼ÓÒÒËáÖÁ pH4.0
7) ËáÐÔ±½·Ó:500 g ¾§Ìå±½·ÓÈÜÓÚ 500 mli Àë×ÓË®ÖУ¬50 ml ÿ·ÝÓÚ-20¡æ ±£´æ£¬4¡æ ¿É±£´æÒ»¸öÔÂ
8) ÒìÄÚ´¼
9)70% ºÍ 100% ÒÒ´¼
10)2mol/L ÒÒËá¼Ø£¬¼Ó±ùÒÒËáÖÁ pH4.8
11)10mol/L LiCl
12)TNE »º³åÒº£º10 mmol/LTris-HCl,PH7.5, ÊÒΣ¬15 mmol/L,NaCl£¬1 mmol/LEDTA
13)TE »º³åÒº:l0 mmol/LTris-HCL PH7.5 1 mmol/LTEDTA
14) Ñв§ºÍÑÐèÆ
15) 񼵻
16) ÀëÐÄ»ú
17) ²£Á§ Pasteur ÎüÁ¿¹Ü£¬200¡æ ¸É¿¾ÖÁÉÙ 3 h
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1) ÔÚÒºµªÖн« 0.4 g ×éÖ¯ÑÐĥΪϸ·ÛÄ©£¬ÎðÈÃ×éÖ¯½â¶³
2) ÔÚÑÐÄ¥¹ý³ÌÖУ¬¼ÓÈë 3.5 ml ³éÌỺ³åÒº£¬³ä·ÖÑÐÄ¥¡£½«ÔȽ¬×ªÒƵ½Ò»¸ö 10 ml ¾Û±ûÏ©¹Ü=Óà 1 ml ³éÌỺ³åÒº³åÏ´ÑÐèƺÍÑв§£¬È»ºóÒÆÖÁ¾Û±ûÏ©¹ÜÖС£
3)23000 g£¬4¡æ, ÀëÐÄ 20mim
4) Óÿ¾¹ýµÄ²£Á§ÎüÁ¿¹Ü½« hS Ðü¸¡ÒºÒÆÈë l0 ml ¾Û±ûÏ©¹Ü¡£
5) ¼Ó 0.4 ml2mol/L ÒÒËáÄÆ£¬»ìÔÈ¡£¼Ó 4 ml ±½·Ó£¬»ì„ò¡£¼Ó 0.8 ml Âȷ£ºÒìÎì´¼£¬»ìÔÈ¡£
6) ¾Û±ûÏ©¹ÜÖÃÓÚ±ùÉÏ 15 min
7) ÀëÐÄ£¬·½·¨Èç²½Öè 3)
8) Óÿ¾¹ýµÄ²£Á§ÎüÁ¿¹Ü½«ÉϲãÐü¸¡ÒºÒÆÈë 30 ml ¾Û±ûÏ©¹Ü£¬¼ÓÈëͬÑùÈÝ»ýµÄ 2mol/LÒÒËá¼Ø£¬»ìÔÈ¡£
9) ¾Û±ûÏ©¹ÜÖÃÓÚ±ùÉÏÖÁÉÙ 30 min
10)44000 g£¬4¡æ ÀëÐÄ 20 min¡£
11) ½«ÉÏÇåÒºÒÆÈë 15 ml ¾ÛÄÚÏ©¹Ü£¬¼Ó 0.6¡«1 ±¶Ìå»ýµÄ 100% µÄÔ¤ÀäÒì±û´¼£¬»ìÔÈ£¬-20¡æ ·ÅÖà 45 min
12) ÒÔ 27OOOg£¬ÓÚ 4¡æ ÀëÐÄ 20 min
13) ÇáÇáµ¹³öÉÏÇåÒº£¬Óà Iml70¾ÒÒ´¼Ï´µÓ³Áµí£¬Èç²½Öè 12 ÀëÐÄ 3mim ¾¡¿ÉÄܽ«ÒÒ´¼µ¹¾»¡£
14) ¼ÓÈË 400ulDEPC Ë®Èܽâ³Áµí£¬ÒÆÖÁ 1.5 ml ¹ÜÖС£
15) ¼Ó 100ul10mol/LLiCl, ·ÅÖÃÖÁÉÙ 2 h¡£
16)12000 g£¬ÀëÐÄ 20 min
17) Óà 1 ml70% ÒÒ´¼Ï´µÓ³ÁµíÁ½´Î
18) ¼ÓÈë 200ulTNE ÖØÐü³Áµí£¬ÔÙ¼Ó 500ul100% ÒÒ´¼£¬-20¡ãC ·ÅÖÃÖÁÉÙ 15 min¡£
19) Èç²½Öè 16 ÀëÐÄ 5mim¡£
20) Óà lml70% ÒÒ´¼Ï´µÓ³ÁµíÁ½´Î¡£
21) ¼ÓÈë 200¡«400ulTE ÖØÐü³Áµí¡£
22) ½«Ã¿¸öÑù±¾Ï¡ÊÍ 30¡«50 ±¶£¬ÔÚ 230mn¡¢260mn¡¢280nm ²âÁ¿¹âÎüÊÕÖµ¡£
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1) ×î³õµÄÀëÐijýÈ¥Á˴󲿷ֲ»ÈÜÐÔ¶à¾ÛÌÇ£¬Èçµí·Û¿ÅÁ£¡£²ÐÓàµÄ×éÖ¯Ôڹܵĵײ¿ÐγɰµÂÌÉ«³Áµí (ÈôÓõÄÊÇÒ¶×Ó£©£¬²»ÈÜÐÔ¶àÌÇÔÚ²ÐÓà×éÖ¯ÉÏÃæÐγɻҰ×É«½º×´²ã
2) µ±ÎüÈ¡ÉÏÇåҺʱ£¬Ó¦Ê®·ÖСÐÄ£¬Îð½ÁÂÒ½º×´³Áµí£¬ÒòΪ¸Ã²ã·Ç³£Èí¡£ÉÏÇåÒºµÄÌå»ý´óÔ¼ 4 ml£¬ÈôÒò³Áµí¶àÃæʹҺÌåÌå»ýÃ÷ÏÔ²»×ãʱ£¬ÓÃèÖÌỺ³åÒº²¹×ã
3) ¼ÓÈËÒÒËá¼Øºó£¬ÑÓ³¤·õÓýʱ¼ä£¨´ï 30 min) »áÌá¸ß RNA µÄÖʾ°£¬ÓÈÆäÔÚ³öÏÖµ°°×ÎÛȾʱ¡£¶àÌÇ»áÐγɻҰ×É«½º×´³Áµí¡£ÈôËùÓõÄ×éÖ¯¶àÌǺ¬Á¿ó{. ÑÓ K ·õÓýʱ¼ä£¨ÖÁ 60 min) Ò²ÓÐÖúÓÚ³Áµí¸ü¶àµÄ¶àÌÇ
4) ¼ÓÈËÒì±û´¼ºó£¬²»Ó¦¿´µ½³Áµí£¬ÈκοɼûµÄ³ÁµíÊDZíÃ÷´óÁ¿¶àÌǵĴæÔÚ. ·õÓýʱ¼ä´óÓÚ 60 min£¬¾Í»áÐγɶàÌdzÁµí
5)RNA ³ÁµíӦΪ°×É«£¬ÈôÓлҰ×É«½º×´³ÁµíÔòΪ¶àÌÇÎÛȾ¡£Óöµ½¸ÃÇé¿ö£¬½«³ÁµíÔÙÐü¸¡ÓÚ 200ul TE, ¼Ó 1 ±¶Ìå»ýµÄ 2mol/L ÒÒËá¼Ø£¬±ùÉÏ·õÓý 30 min¡£12000 g£¬4¡ãC ÀëÐÄ 20 min. ½«ÉÏÇåÒºÒÆÖÁһР1.5 ml ¹ÜÖУ¬ÓÃ
2.5 ±¶Ìå»ýµÄ 100% ÒÒ´¼³ÁµíRNA,-20¡æ15 min¡£¼ÌÐø·½·¨ÖеIJ½Öè 16)
6) ÅÐ¶Ï RNA ·ÖÀëµÄ³É¹¦Óë·ñ£¬¿Éͨ¹ý²âÁ¿ÔÚ 230nm¡¢260nm¡¢280mn ´¦µÄ×ÏÍâÎüÊÕÀ´ÆÀ¹À RNA µÄ²úÁ¿ºÍÖÊÁ¿¡£Èô A260/230 ֵСÓÚ 2, Ôò±íÃ÷¶àÌǺÍ/»ò¶à¾Û±½·ÓÎÛȾ£»ÈôA260/280 ±ÈֵСÓÚ 1.7, ±íÃ÷µ°°×ÎÛȾ£¬ÔÚÇíÖ¬
ÌÇÄý½ºØ°³öÏÖµÄ 28S ºÍ 18S rRNA£¬¿ÉÓÃÒÔÆÀ ¹À RNA µÄÍêÕûÐÔ
7) ¸Ã·¨ÌáÈ¡µÄ RNA ÊÊÓÚ poly(A)+ µÄ·ÖÀ룬Northern Ó¡¼£·ÖÎö£¬cDNA ·ÖÎö£¬RT-pcr À©Ôö¡£ |
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