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新虫 (小有名气)

[求助] 我想做4个片段之间的融合,求高手指点 已有3人参与

我想做4个片段之间的融合,依据融合PCR设计四对引物,现在已经将4个片段扩增出来了,第一次将两个片段进行融合,1片段400多bp,2片段200多bp,第一步将1,2片段融合PCR,发现有好几条杂带,第二步分别用1-2片段融合回收产物、1-2片段融合未回收产物与片段3等体积混合,用酶,buffer,水补足25微升,不加引物,5个循环,后加入酶,buffer,水,引物,补足50微升,后扩增30循环,发现没有目的片段

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匿名

用户注销 (初入文坛)

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4楼2016-11-08 11:09:31
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迷路人啊

新虫 (小有名气)

2楼2016-11-07 21:39:56
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用In-Fusion的酶可以做多片段连接,我做过两个片段同时连入一个质粒的没问题,4个片段是不是可行我不清楚。和普通的连接只有设计引物时候不一样,而且基本不受酶切位点的限制。
3楼2016-11-08 10:01:51
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有同源壁,有时多个片段,可以买一下那个一部克隆试剂盒,一步就好了,我们在用,挺方便的
···
5楼2016-11-09 10:41:25
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