| 查看: 3372 | 回复: 6 | |||
sdjnyxn123银虫 (小有名气)
|
[求助]
请问SDS-PAGE每次都跑成这样是时间太长还是不够啊？ 已有1人参与
|
 基本每次跑都跑成这样，我的目的蛋白大小比较小，有一个甚至是10kD以下的 请问看这图的话是跑过头了还是跑得还不够啊？ 这次是80V跑了1h，然后改成100V跑了2h零5min的 以前跑过40min+1h40min的也几乎是这样 是应该再跑一段时间还是提前一些呢？ 而且现在跑的条带特别模糊，是因为跑得时候发热太严重吗？ 我试过一次恒流跑，30mA跑了三个多小时才跑到中间··· 如何能跑出别人那种条带清晰分明，并且低分子量也很清晰的条带呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有127人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
2楼2016-10-26 18:58:32
3楼2016-10-26 20:54:55
winyuyuyu123
金虫 (小有名气)
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 813.3
- 红花: 2
- 帖子: 68
- 在线: 25.3小时
- 虫号: 4912791
- 注册: 2016-08-12
- 专业: 病原真菌学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kuaile5420: 金币+3, 欢迎发帖交流 2016-10-27 20:54:39
感谢参与，应助指数 +1
kuaile5420: 金币+3, 欢迎发帖交流 2016-10-27 20:54:39
|
楼主，看了你的电泳图，我有几个建议： 1.关于条带不直有拖尾，可能是凝胶不均匀，也可能是蛋白有降解。建议配胶前，洗净夹板晾干；配胶时充分混匀再灌胶。制备样品时加入少许PMSF和DTT，样品的预处理，加入5X SDS-Loading后沸水煮10min，再上样。 2.关于条带宽度不一，是因为你的上样量不均一。建议在蛋白样品制备后，做一个BCA定量，一个小时就搞定，然后取等量的蛋白样品（如10μg），用1X SDS-Loading补齐至等体积上样电泳。 3.关于最左侧条带弯曲，是电泳时的边沿效应导致。建议是用等体积的1X SDS Loading加入到空的点样孔进行平衡。 4.关于凝胶大小及底部皱缩。浓度越大的凝胶，塑性越强，但是也容易因干燥而卷曲皱缩。因此在拍照前及拍照时，要保持凝胶湿润，可往上浇洒少许电泳液。 5.关于蛋白分子量，不同浓度的凝胶分辨率不一，Takara说明书上写的很详细，15-40kd用12%的gel，20kd以下用15%gel。 6.楼主这个电泳图不知是否有Marker，因此实在看不出10kd条带应该在哪。建议楼主买个预染的Marker，电泳时就可分辨不同大小条带位置，从而调整最适电泳时间。至于Marker规格，根据你自己的蛋白大小去选择。 以上 |
4楼2016-10-27 08:47:26
bright8
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 26 (小学生)
- 金币: 5937.1
- 散金: 955
- 红花: 5
- 帖子: 1333
- 在线: 109.9小时
- 虫号: 1476736
- 注册: 2011-11-04
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
5楼2016-10-28 10:56:23
|
本帖内容被屏蔽 |
6楼2016-10-28 11:17:18
7楼2016-10-29 18:02:33