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Ivy尘

新虫 (正式写手)

[求助] 琼脂糖凝胶电泳总是丑,愁死个人,求助! 已有8人参与

实验做得挺久的,可是琼脂糖凝胶电泳跑得一直很丑,最近胶回收总是出丑图,位置还不准,真是受不了了,来请教!

1.我是在loading buffer(50% 甘油,EDTA 1% 溴酚蓝,5 mM EDTA )里加 1%Gel red ,上样时5微升Loading buffer+50毫升 PCR产物,点样孔几乎溢出。
2.BioRAD 电源、电泳槽(小),电压100V,跑半小时,溴酚蓝到胶块中间。

最近PCR产物胶回收的图,溴酚蓝带、目的条带都挤在一起了,位置根本不准,好生气。小孔点5微升位置正常。
琼脂糖凝胶电泳总是丑,愁死个人,求助!

从前正常一点的,酶切产物胶回收图,我觉得还好呢。
琼脂糖凝胶电泳总是丑,愁死个人,求助!-1

我自己的推测:
1. 上样量过大?loading buffer量不合适?
2.制胶不均匀?我都是沸腾两次才倒胶的。

求助~~
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Ivy尘

新虫 (正式写手)

引用回帖:
30楼: Originally posted by 寂寞之巅 at 2016-10-28 08:41:01
配胶不是用缓冲液配置吗?为啥你是用无菌水配置  胶在煮的时候  拿出来 摇一下  倒胶是的温度不要太高 不烫手的时候加入染料 再倒...

我用TBE缓冲液配胶的,加无菌水是因为沸腾2min会跑掉很多水,预先补足。现在换了六一的电源和槽,好很多了。bio rad竟然还比不上国产的。。。
35楼2016-10-28 18:22:23
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生物技术专业

铁虫 (小有名气)

3楼2016-10-26 14:39:33
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东东饭先森

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Ivy尘: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-10-26 17:43:43
kuaile5420: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-27 19:40:36
kuaile5420: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-27 20:44:58
以我多年跑图经验,应该就是制胶不均匀,溶胶时你在正常比例上多加10 ml TAE,然后溶2分钟,在旁边看着注意不要溢出。这样跑的图绝对美美哒
年轻没有失败
4楼2016-10-26 15:26:48
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双鱼座的瓶盖

金虫 (小有名气)

感觉你的胶就没有做好,

发自小木虫IOS客户端
5楼2016-10-26 15:38:48
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