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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T载体单酶切切开了，双酶切切不开
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yuy111

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
If the two enzymes can share the buffer you are using, then most likely construct doesnt have proper insertion . You may check the size of positive constructions with  another two enzymes for double digestion.
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11楼2016-10-27 12:20:04
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匿名

用户注销 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
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12楼2016-10-27 16:27:32
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yeyatouyhj

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也遇到过这种情况，当时选的限制酶有一个是Xba1酶，好像有问题。
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13楼2016-10-28 14:48:32
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吗子

金虫 (小有名气)
单酶切都能切开说明没问题。但

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深秋
14楼2016-10-28 15:01:50
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吗子

金虫 (小有名气)
双酶切的效率比单酶切要低得多，提高双酶切效率要注意几点：1共用的buffer是都都适合两个酶。2两个酶切位点之间最好有一些碱基隔着。3尽量延长酶切时间。

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深秋
15楼2016-10-28 15:06:02
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chase1024

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

分步酶切，第一步酶切柱回收，第二次胶回收
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16楼2016-10-28 22:19:07
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

又酶切，酶的buffer，可以共用吗？温度也一样吗？都是快酶或慢酶吗？
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17楼2016-10-28 22:29:49
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匿名

用户注销 (著名写手)
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18楼2016-11-05 15:10:36
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faye菲

铁虫 (小有名气)
请问楼主解决了吗？我出现了和你一样的问题

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19楼2017-06-29 14:12:29
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王查查23

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
20楼2017-06-29 21:06:23
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