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zhoufangreat

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 氧化酶物理吸附 已有1人参与

我最近在做酶催化葡萄糖传感器,将ZnO修饰的电极浸泡在葡萄糖氧化酶溶液中12h,但是在扫描电镜下未看到有酶吸附在ZnO上(电极表面是超亲水的),并且I-T阶梯出不来。我又在电极表面滴了10ul酶溶液,在4oC冰箱中干燥后又滴涂了2.5ul的nafion膜,I-T阶梯依然出不来。酶是新买的,溶液也是现配的,应该不会出现问题的。各位虫友帮忙分析一下原因,不胜感激!@dut_ameng@神魔流转
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wzykobe

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的酶浓度还是要搞大一点,另外这个酶反应是需要氧气的,你需要通氧气饱和,再测,最好是酶用PBS配,然后再加NAFION。
2楼2016-10-31 21:06:41
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zhoufangreat

铁杆木虫 (正式写手)

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2楼: Originally posted by wzykobe at 2016-10-31 21:06:41
你的酶浓度还是要搞大一点,另外这个酶反应是需要氧气的,你需要通氧气饱和,再测,最好是酶用PBS配,然后再加NAFION。

非常感谢

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3楼2016-11-01 08:53:40
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不飘零ttt

新虫 (小有名气)

你好,我有一个电化学相关问题想请教。

我修饰了一个D氨基酸氧化酶酶电极,理论上来说电极放入含D-氨基酸的电解液中做CV图会出现氧化还原峰,可是我测3个浓度CV图都和背景缓冲液一样,没有氧化还原峰出现。

另外,考虑到可能浓度梯度不够及I-t曲线可能更灵敏,用5x10-5M,~1x10-3M系列氨基酸浓度做了I-t曲线,依旧没有信号。

实验现象表明酶已经固定在电极上,我推测是氨基酸没有在酶电极表面发生反应,但是查文献过程中也没发现反应需要什么特别的条件,请问有人对酶电极有了解吗?可能什么原因导致检测不到信号呢?

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4楼2018-09-17 22:02:10
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zhoufangreat

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 不飘零ttt at 2018-09-17 22:02:10
你好,我有一个电化学相关问题想请教。
我修饰了一个D氨基酸氧化酶酶电极,理论上来说电极放入含D-氨基酸的电解液中做CV图会出现氧化还原峰,可是我测3个浓度CV图都和背景缓冲液一样,没有氧化还原峰出现。
另外,考 ...

1. CV不出峰,你可以试着把电压范围设置大一点;
2. it没信号,在没有加葡萄糖溶液之前(即PBS溶液中),等待电流达几乎稳定了再去加葡萄糖溶液。
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5楼2018-09-18 09:42:19
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不飘零ttt

新虫 (小有名气)

6楼2018-09-18 10:53:01
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不飘零ttt

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 不飘零ttt at 2018-09-18 10:53:01
非常感谢您的回复。

非常感谢您的回复。
我用的是d氨基酸氧化酶,电极上修饰酶之后出现酶的氧化还原峰,检测氨基酸时,峰电流应该增大,可是我检测许多浓度的氨基酸,这个峰电流都没有变化,cv电位调宽调窄都不行。
对于i-t曲线,确实是稳定以后才加的样品。电位选择的是cv图中峰电流应该发生变化的电位,可还是没有阶梯。
按照您的经验,可能是哪里出了问题呢?

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7楼2018-09-18 10:58:21
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zhoufangreat

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 不飘零ttt at 2018-09-18 10:58:21
非常感谢您的回复。
我用的是d氨基酸氧化酶,电极上修饰酶之后出现酶的氧化还原峰,检测氨基酸时,峰电流应该增大,可是我检测许多浓度的氨基酸,这个峰电流都没有变化,cv电位调宽调窄都不行。
对于i-t曲线,确实 ...

cv和it都没变化,可能是你的传感器的性能不太好,或者酶失活了(这种可能性小)。你试试更高浓度氨基酸的响应电流,如果还是没有变化,传感器的性能不好的可能性比较大。这只是我个人见解
越努力越幸运
8楼2018-09-18 15:19:50
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不飘零ttt

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zhoufangreat at 2018-09-18 15:19:50
cv和it都没变化,可能是你的传感器的性能不太好,或者酶失活了(这种可能性小)。你试试更高浓度氨基酸的响应电流,如果还是没有变化,传感器的性能不好的可能性比较大。这只是我个人见解...

好的,非常感谢。

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9楼2018-09-19 16:36:28
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