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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

[求助] 毕业实验,转化涂布不长菌求分析 已有4人参与

调整了一下卡那浓度,未切质粒长出菌了,但重组质粒想不出来。求指导分析一下,都有什么原因?未酶切的质粒长菌至少说明我的感受态没问题,有导进去。也说明我的未切质粒正常。那是什么原因导致我的重组质粒长不出菌?
dna和质粒的比例?质粒的酶切回收,去磷酸化没做好?还是连接出了错?

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star013

新虫 (知名作家)


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3楼2016-10-21 15:37:45
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

2楼2016-10-21 14:42:58
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D_gz

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-22 21:58:51
我刚开始做连接也是这样,最可能的原因是连接不成功,载体和插入片段比例会有影响,一般1:3到1:5就行。我想问你,载体质粒酶切回收和目的基因酶切回收的核酸电泳浓度如何?这个很关键。
不做怎么知道。
4楼2016-10-21 16:23:19
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by D_gz at 2016-10-21 16:23:19
我刚开始做连接也是这样,最可能的原因是连接不成功,载体和插入片段比例会有影响,一般1:3到1:5就行。我想问你,载体质粒酶切回收和目的基因酶切回收的核酸电泳浓度如何?这个很关键。

质粒还好,回收dna差点,老师说也可以用。我的比例算出来接近1:5,我加1ul质粒,9ul dna

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5楼2016-10-21 17:02:31
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