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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 【验证电泳图很简陋】菌液PCR验证以及测序问题
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江边鸟

银虫 (小有名气)

[求助] 【验证电泳图很简陋】菌液PCR验证以及测序问题 已有1人参与

样品4K的片段，插入到PMD19T载体中，制备成菌液。

菌液PCR验证出现两个条带（菌P引物为通用引物M13F(-47）和M13R(-48)），见手画图，原胶图未保存，各位大牛见谅。

1：点样孔    2:与marker比对差不多4K片段大小的条带   3：目测空载条带   4：溴酚蓝条带


   4个菌液送测序，M13F(-47）和M13R(-48)测序结果全部空载，插入片段中间引物测序无信号。
   
    将2这个4K的片段条带割胶回收送测序，M13F(-47）和M13R(-48)测序结果无信号。


请问菌P验证中出现的2号条带，差不多4K大小的是怎么回事？另两个样品3.5K和2K的菌P验证也是出现这个情况，也是有两条带，一条3.5K和空载条带，一条2K和空载条带。

菌P，验证条带，有插入片段大小的条带和空载条带同时存在，请问插入片段的条带是怎么回事？谢谢

【验证电泳图很简陋】菌液PCR验证以及测序问题
11.png@biostar2009@飞约疯人院
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1楼 2016-10-19 17:06:58
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌P可能取到了培养基，里面污染目的片段。

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2楼2016-10-19 19:24:10
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江边鸟

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 梦想天行 at 2016-10-19 19:24:10
菌P可能取到了培养基，里面污染目的片段。

菌液是挑的克隆菌斑摇菌的…污染了目的片段？小小白不是很明白这句话的意思？求指教 谢谢

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3楼2016-10-20 10:07:31
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 江边鸟 at 2016-10-20 10:07:31
菌液是挑的克隆菌斑摇菌的…污染了目的片段？小小白不是很明白这句话的意思？求指教 谢谢
...

嗯嗯，很可能的，也可能是PCR试剂污染。

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4楼2016-10-20 17:34:09
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