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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 病原/病毒 » 利用qPCR检测野生型病毒和突变病毒的感染效率
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落叶知秋1

新虫 (初入文坛)

[交流] 利用qPCR检测野生型病毒和突变病毒的感染效率 已有1人参与

我现在有SFV及其突变型的两种病毒。我想看这两个病毒感染细胞的区别，但是不知道病毒滴度，我可以用SFV病毒的某一个质粒作为模板然后做一个qPCR，然后将质粒模板浓度与Ct值做一个标准曲线。得到标准曲线后，用两个病毒感染细胞后提取病毒RNA并做qRT-PCR，并利用Ct值将两个病毒的量调整在一个数量级。请问各位大神这样做行得通吗？急急急
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1楼 2016-10-18 15:59:33
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许彦

木虫 (正式写手)
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有几个问题。1.你的

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2楼2016-10-20 05:12:33
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许彦

木虫 (正式写手)
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1.你的原始毒株和变异株是不是用同一对引物？2.如果是同一对引物的话怎么区别是否突变。3.可以通过分光光度计来测定质粒的量之后稀释出四条或者更多的标准曲线。

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3楼2016-10-20 05:15:42
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落叶知秋1

新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by 许彦 at 2016-10-20 05:15:42
1.你的原始毒株和变异株是不是用同一对引物？2.如果是同一对引物的话怎么区别是否突变。3.可以通过分光光度计来测定质粒的量之后稀释出四条或者更多的标准曲线。

是用得同一对引物。我已经有突变的病毒。我想先提取两种病毒的RNA，然后qRT-PCR，得出对应的Ct值，在将Ct值与变准曲线比较。最后将两个病毒的Ct值调到相等。这样理论认为两个病毒的量是相等的。PS:我想用相等量的病毒去感染细胞，然后看两个病毒的感染效果。但是不知道这样可不可以
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4楼2016-10-20 15:43:24
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许彦

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4楼: Originally posted by 落叶知秋1 at 2016-10-20 15:43:24
是用得同一对引物。我已经有突变的病毒。我想先提取两种病毒的RNA，然后qRT-PCR，得出对应的Ct值，在将Ct值与变准曲线比较。最后将两个病毒的Ct值调到相等。这样理论认为两个病毒的量是相等的。PS:我想用相等量的病 ...

我有一个建议。你按照你的设计的引物合成质粒，然后用质粒定标准曲线。就不用你去来回算了。

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5楼2016-10-20 19:10:23
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落叶知秋1

新虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by 许彦 at 2016-10-20 19:10:23
我有一个建议。你按照你的设计的引物合成质粒，然后用质粒定标准曲线。就不用你去来回算了。
...

我就是用质粒为模板做得qPCR，然后以Ct值为纵坐标，质粒拷贝数为横坐标做得标准曲线。
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6楼2016-10-21 08:19:29
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许彦

木虫 (正式写手)
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6楼: Originally posted by 落叶知秋1 at 2016-10-21 08:19:29
我就是用质粒为模板做得qPCR，然后以Ct值为纵坐标，质粒拷贝数为横坐标做得标准曲线。...

看懂你的意思了，我觉得没问题的，但是qpcr敏感性太强，

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7楼2016-10-21 14:36:21
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