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昺昺

木虫 (小有名气)

[求助] 菌液PCR用M13扩增不出来 已有4人参与

用引物A扩增出600bp的片段想测序,转化后用M13做菌液PCR没有条带,用引物A做有600bp条带,送去用M13测序没有成功,现在又用引物A重新送去测序,结果暂时还没有回来。这个T载体原先一直用,没有问题。
    想请教各位大牛遇到过这种情况没?该如何解决?
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太阳出来,星星要走。
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ouzhiying

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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昺昺: 金币+3, 有帮助 2016-10-20 07:50:21
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-20 09:01:45
实验失败,重新开始
4楼2016-10-19 11:21:35
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普通回帖

fanfan9056

银虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-20 08:56:00
你确定您的片段转进去了?M13检测没有条带,说明克隆是空载体,没有转进去。
2楼2016-10-19 10:45:08
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bio转录组

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
昺昺: 金币+3, 有帮助 2016-10-20 07:50:07
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-20 08:59:57
应该是没连接进去,重新做一下试试。下次连接时间可以长一点,一般连19T都是M13引物测序
生活活生生累死
3楼2016-10-19 11:15:30
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
昺昺: 金币+3, 有帮助 2016-10-20 07:50:27
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-20 09:04:09
没连接进去,重新做一下试试。下次连接酶多点,时间可以长一点。

发自小木虫Android客户端
5楼2016-10-19 19:37:21
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昺昺

木虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-20 09:04:15
引用回帖:
3楼: Originally posted by bio转录组 at 2016-10-19 11:15:30
应该是没连接进去,重新做一下试试。下次连接时间可以长一点,一般连19T都是M13引物测序

没连接进去似乎是最合理的解释。但是我还有个疑问,没连接进去,目的片段也会随着菌落存在吗?我做了10个转化,总共挑了96个单菌落,用目的片段的引物扩增,有94个单菌落扩增出了目的条带。
太阳出来,星星要走。
6楼2016-10-20 07:53:56
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lemonvivi

新虫 (小有名气)

7楼2016-10-20 20:41:32
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饺子弟

铜虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-22 21:59:54
菌液电泳的加入的模版量和酶的选择也是影响因素,可以考虑一下,希望不是假阳性。

发自小木虫IOS客户端
8楼2016-10-21 22:33:53
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饺子弟

铜虫 (小有名气)

9楼2016-10-21 22:35:07
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flhua

木虫 (正式写手)

bachelordom

蓝白版筛选就行 挑白斑

发自小木虫IOS客户端
只要有梦想,坚持就一定能实现
10楼2016-10-22 13:00:09
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