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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌液PCR用M13扩增不出来
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昺昺

木虫 (小有名气)

[求助] 菌液PCR用M13扩增不出来 已有4人参与

用引物A扩增出600bp的片段想测序，转化后用M13做菌液PCR没有条带，用引物A做有600bp条带，送去用M13测序没有成功，现在又用引物A重新送去测序，结果暂时还没有回来。这个T载体原先一直用，没有问题。
    想请教各位大牛遇到过这种情况没？该如何解决？
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太阳出来，星星要走。
1楼 2016-10-18 13:32:54
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ouzhiying

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
昺昺: 金币+3, ★有帮助 2016-10-20 07:50:21
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-20 09:01:45
实验失败，重新开始
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4楼2016-10-19 11:21:35
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普通回帖

fanfan9056

银虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-20 08:56:00
你确定您的片段转进去了？M13检测没有条带，说明克隆是空载体，没有转进去。
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2楼2016-10-19 10:45:08
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bio转录组

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
昺昺: 金币+3, ★有帮助 2016-10-20 07:50:07
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-20 08:59:57
应该是没连接进去，重新做一下试试。下次连接时间可以长一点，一般连19T都是M13引物测序
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生活活生生累死
3楼2016-10-19 11:15:30
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
昺昺: 金币+3, ★有帮助 2016-10-20 07:50:27
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-20 09:04:09
没连接进去，重新做一下试试。下次连接酶多点，时间可以长一点。

发自小木虫Android客户端
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5楼2016-10-19 19:37:21
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昺昺

木虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-20 09:04:15
引用回帖:
3楼: Originally posted by bio转录组 at 2016-10-19 11:15:30
应该是没连接进去，重新做一下试试。下次连接时间可以长一点，一般连19T都是M13引物测序

没连接进去似乎是最合理的解释。但是我还有个疑问，没连接进去，目的片段也会随着菌落存在吗？我做了10个转化，总共挑了96个单菌落，用目的片段的引物扩增，有94个单菌落扩增出了目的条带。
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太阳出来，星星要走。
6楼2016-10-20 07:53:56
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lemonvivi

新虫 (小有名气)
可能是假阳性

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7楼2016-10-20 20:41:32
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饺子弟

铜虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-22 21:59:54
菌液电泳的加入的模版量和酶的选择也是影响因素，可以考虑一下，希望不是假阳性。

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8楼2016-10-21 22:33:53
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饺子弟

铜虫 (小有名气)
菌落PCR刚才发错了

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9楼2016-10-21 22:35:07
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flhua

木虫 (正式写手)

bachelordom
蓝白版筛选就行 挑白斑

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只要有梦想，坚持就一定能实现
10楼2016-10-22 13:00:09
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