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mjl3680木虫 (小有名气)
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[交流]
求助PCR问题
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我用一段长约1900bp的已知序列做模板,设计两个引物互补长度约为12-13个bp,两端设计了酶切位点,可就是P不出来,基本上没有任何条带，退火温度从50-58都做了,本来认为这步很简单,不知道是引物出现问题吗?谁能帮我看看,引物1改变了两个碱基,是怕形成二聚体,我这问题在哪啊,帮帮我吧 引物1: 5'-3' gcgcggatccATGGAGTTATTA 上游引物 正链5' BamH I Tm 63.9 引物2: 5'-3' gccggccgTATTTCTTCTTGA 下游引物 正链3' Sac I Tm 64.1 要扩的序列gcgcggatccATGGAGTTATTA AATAGTTATAATTTTGTTTTATTCGTATTAACTCAAATGATATTAATGTT TACAATACCAGCTATAATTAGTGGTATTAAGTACAGTAAACTTGATTATT TTTTCATTATAGGAATTTCGACATTATCGTTATTTCTATTTAAAATGTTT GATAGCGCGTCCTTAATCATTTTAACTTCATTCATTATTATAATGTATTT TGTCAAAATCAAATGGTATTCTATTTTGTTGATTATGACTTCACAGATTA TTCTGTACTGTGCTAACTACATGTATATTGTTATATATGCATATATCACC AAGATTTCTGATAGTATATTTGTAATATTCCCTAGCTTTTTTGTAGTTTA TGTGACTATTAGTATACTATTCTCATATATAATAAATAGAGTTCTCAAAA AAATTAGCACACCATATCTAATACTAAACAAAGGATTTTTAATAGTTATT TCGACTATCTTACTGCTTACTTTTTCATTATTTTTCTTTTATTCACAAAT AAACTCGGATGAAGCTAAAGTAATAAGGCAGTATTCTTTTATTTTTATTG GTATCACTATATTTTTAAGTATATTAACATTTGTTATTTCTCAA TTTCTC CTTAAAGAGATGAAATATAAACGTAATCAAGAAGAAATTgccggccg [ Last edited by 350784478 on 2009-11-5 at 14:51 ] |
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