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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 测序结果无信号或新号弱
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wy604987664

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 小冀- at 2016-10-16 17:53:43
可能是提的质粒的问题，你重新提，重新送去测序吧

我们不是送质粒，送的菌液，一次摇4ml，2ml提质粒自己用来酶切验证，2ml保菌用来送测，一般摇出来当天就送走，也不存在菌液放久不行

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11楼2016-10-16 21:44:20
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顶你个球

金虫 (小有名气)

钻研，耐心，
遇到过，一样的问题，菌P,提质粒都好，测序没结果，折磨了好长时间，后来一切全换，成功了

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12楼2016-10-16 23:14:40
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顶你个球

金虫 (小有名气)

钻研，耐心，
加油

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13楼2016-10-16 23:14:54
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by wy604987664 at 2016-10-16 21:44:20
我们不是送质粒，送的菌液，一次摇4ml，2ml提质粒自己用来酶切验证，2ml保菌用来送测，一般摇出来当天就送走，也不存在菌液放久不行
...

好吧，我们送菌液没出现过这种情况

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···
14楼2016-10-16 23:28:21
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把质粒转到其他感受态里，你多转几种常用的，如DH5A,TOP10在送去测序，
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采菊东篱下，悠然见南山。
15楼2016-10-17 08:57:14
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江边鸟

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
10楼: Originally posted by wy604987664 at 2016-10-16 21:42:50
我重新试了3次了，还是不行
...

你菌p质粒p有条带，条带弱，说明菌液里是有你的模板的，只是量少。杂菌占了大多数，测序公司摇菌抽出的质粒杂菌占多数。这种情况你可以将菌p或质粒p的产物二次扩增回收后再测。或者重新挑克隆

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16楼2016-10-17 09:26:12
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csunny521

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
17楼2016-10-17 22:15:12
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qiaoli3213

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by wy604987664 at 2016-10-16 21:44:20
我们不是送质粒，送的菌液，一次摇4ml，2ml提质粒自己用来酶切验证，2ml保菌用来送测，一般摇出来当天就送走，也不存在菌液放久不行
...

有可能质粒浓度太稀了，我每次都是摇5~6ml，4ml提质粒。你可以试试
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18楼2016-10-18 10:06:35
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qiaoli3213

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by wy604987664 at 2016-10-16 21:44:20
我们不是送质粒，送的菌液，一次摇4ml，2ml提质粒自己用来酶切验证，2ml保菌用来送测，一般摇出来当天就送走，也不存在菌液放久不行
...

试试送质粒去测序，送菌液不靠谱，运输过程中可能出现各种问题，菌液活性会受到影响。
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19楼2016-10-18 10:08:41
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婷微树

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得你的质粒提的浓度要是不高的话可能是你的菌不纯，要重新挑单菌落。或者换一下你的测序样品类型。换成菌液或质粒或PCR产物。或者你让公司重新设计引物测序
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20楼2016-10-18 10:33:39
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