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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于荧光定量溶解曲线的问题
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 关于荧光定量溶解曲线的问题

大家好：我看到有些荧光定量的溶解曲线前有一个95度升温的过程，这是为什么啊？作用是啥啊？不是太明白呐。
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1楼 2016-10-13 21:39:03
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tj113578888

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-10-16 09:22:49
xn8008: 金币+1, 应助指数+1 2016-10-16 09:22:55
lwk5716: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-10-17 20:59:30
溶解曲线95到低温是为了形成双链，包括同源和异源双链，之后有个低温到高温过程，解链，此时如果用的是染料或荧光探针能观察到荧光信号降低，能看到峰型图

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不求事事顺心，但求问心无愧
6楼2016-10-16 07:50:12
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普通回帖

琴师奥尼尔

新虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-10-16 09:21:58
来图看看

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2楼2016-10-14 08:30:38
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徐二少

新虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-16 09:22:32
和普通PCR一样，前面需要一个解链过程。
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3楼2016-10-14 09:50:24
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-10-16 09:22:37
引用回帖:
3楼: Originally posted by 徐二少 at 2016-10-14 09:50:24
和普通PCR一样，前面需要一个解链过程。

那这个解链是啥目的啊？

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4楼2016-10-14 10:37:41
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徐二少

新虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-10-16 09:22:43
引用回帖:
4楼: Originally posted by lwk5716 at 2016-10-14 10:37:41
那这个解链是啥目的啊？
...

只有解链了才能进行扩增啊，小兄弟，建议你还是去看看荧光定量和PCR的原理吧

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5楼2016-10-14 11:16:49
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 琴师奥尼尔 at 2016-10-14 08:30:38
来图看看

这是图，我说第五步是啥目的啊？
关于荧光定量溶解曲线的问题
曲线.png
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7楼2016-10-17 21:04:50
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 徐二少 at 2016-10-14 11:16:49
只有解链了才能进行扩增啊，小兄弟，建议你还是去看看荧光定量和PCR的原理吧
...

我说的是第五步的目的，也是用于扩增吗？
关于荧光定量溶解曲线的问题-1
曲线.png
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8楼2016-10-17 21:06:08
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 琴师奥尼尔 at 2016-10-14 08:30:38
来图看看

好的。
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9楼2016-10-17 21:06:59
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忘丢丢

新虫 (初入文坛)
请问溶解曲线峰对应的温度一定是退火温度吗？我做的退火温度60度，但峰对应的是85度左右，也是唯一的峰，这里面有什么问题呢？

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10楼2016-11-01 18:08:28
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