不同的基因片段连上相同质粒转化的时候能进入同一个大肠杆菌吗 - 分子生物 - DNA重组

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张凡云

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貌似会出现质粒不相容性，只能进入一个，但是你可以选择两种载体转化进去

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11楼2016-10-16 09:12:32

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lemonvivi

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不行

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12楼2016-10-16 09:58:43

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风尤溪渐

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7楼: Originally posted by Neo2000 at 2016-10-15 18:21:57
不可能，存在质粒不相容的问题

同一种质粒而且目的基因R1 R2是多倍体中克隆出来的同个基因同源性为85%

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13楼2016-11-04 11:00:57

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风尤溪渐

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9楼: Originally posted by queen3511 at 2016-10-16 01:50:50
表达载体连两个基因片段做过，连好一个在连一个的做，然后再转化，成功的。你两个基因混在一起连T载，怎么做的呢？两个基因片段的酶切位点一样？那就不可能同时连上，而且两个存在竞争。难不成两个基因片段的酶切位 ...

不是两个基因同时连在一个载体上。我的是TA克隆，同一种质粒目的基因R1 R2是多倍体中克隆出来的同个基因同源性约85%，因为跑PCR后分不开这里面的同源性很高的这两个序列，大小都是一样的所以一起切下来做转化希望在单菌落中区分开其中的有差别的序列

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14楼2016-11-04 11:06:06

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14楼: Originally posted by 风尤溪渐 at 2016-11-04 11:06:06
不是两个基因同时连在一个载体上。我的是TA克隆，同一种质粒目的基因R1 R2是多倍体中克隆出来的同个基因同源性约85%，因为跑PCR后分不开这里面的同源性很高的这两个序列，大小都是一样的所以一起切下来做转化 ...

会同时进入同一大肠杆菌，但一种大肠杆菌能容纳多种不同复制子的质粒，但不能容纳同一复制子的质粒。相同复制子，但不同序列的质粒会发生竞争，多传几代后，竞争性弱的质粒就丢失了。

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采菊东篱下，悠然见南山。