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张凡云

至尊木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
貌似会出现质粒不相容性,只能进入一个,但是你可以选择两种载体转化进去

发自小木虫IOS客户端
11楼2016-10-16 09:12:32
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lemonvivi

新虫 (小有名气)

12楼2016-10-16 09:58:43
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风尤溪渐

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by Neo2000 at 2016-10-15 18:21:57
不可能,存在质粒不相容的问题

同一种质粒  而且目的基因R1 R2是多倍体中克隆出来的同个基因  同源性为85%
13楼2016-11-04 11:00:57
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风尤溪渐

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by queen3511 at 2016-10-16 01:50:50
表达载体连两个基因片段做过,连好一个在连一个的做,然后再转化,成功的。你两个基因混在一起连T载,怎么做的呢?两个基因片段的酶切位点一样?那就不可能同时连上,而且两个存在竞争。难不成两个基因片段的酶切位 ...

不是两个基因同时连在一个载体上。我的是TA克隆,同一种质粒  目的基因R1 R2是多倍体中克隆出来的同个基因  同源性约85%,因为跑PCR后 分不开这里面的同源性很高的这两个序列,大小都是一样的 所以一起切下来做转化  希望在单菌落中区分开其中的有差别的序列
14楼2016-11-04 11:06:06
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781055707

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by 风尤溪渐 at 2016-11-04 11:06:06
不是两个基因同时连在一个载体上。我的是TA克隆,同一种质粒  目的基因R1 R2是多倍体中克隆出来的同个基因  同源性约85%,因为跑PCR后 分不开这里面的同源性很高的这两个序列,大小都是一样的 所以一起切下来做转化 ...

会同时进入同一大肠杆菌,但一种大肠杆菌能容纳多种不同复制子的质粒,但不能容纳同一复制子的质粒。相同复制子,但不同序列的质粒会发生竞争,多传几代后,竞争性弱的质粒就丢失了。
采菊东篱下,悠然见南山。
15楼2016-11-04 11:26:57
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C小杨

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果是电转的话,会出现一个以上质粒进入同一个菌,但几个质粒一般是不能共存的。遇到过一种特例,两个质粒仅有少数几个氨基酸差异,是可以一直共存的。
16楼2016-11-04 15:27:58
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hattie919822

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一个片段连上之后 可能会改变一些空间结构导致第二个不好链接,所以 都是先练完一个,再提取酶切连接第二个的
不见不知不伴不惜不
17楼2016-11-18 17:03:31
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