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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩增
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绿松石6727

新虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增 已有3人参与

我要扩的这个基因，文献中用的这一对引物不仅Tm值相差十几度，而且反向引物GC含量很高？有什么好的建议扩增吗？

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1楼 2016-10-12 21:10:02
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绿松石6727

新虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-10-13 11:44:24
忘了说了，我的模板也是高GC的

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2楼2016-10-12 21:28:52
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wallee

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-10-13 11:44:29
xn8008: 金币+1 2016-10-13 11:44:39
xn8008: 应助指数+1 2016-10-13 11:44:47
加GC enhancer

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

绿松石6727
3楼2016-10-12 23:40:32
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绿松石6727

新虫 (小有名气)
★
送红花一朵
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-13 11:44:53
引用回帖:
3楼: Originally posted by wallee at 2016-10-12 23:40:32
加GC enhancer

我用的就是TAKALA的LA Taq,配GC buffer的

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4楼2016-10-13 10:35:50
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wallee

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 绿松石6727 at 2016-10-13 10:35:50
我用的就是TAKALA的LA Taq,配GC buffer的
...

那做个梯度吧

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5楼2016-10-13 12:12:34
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bio转录组

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-13 22:48:09
针对GC含量高的问题，现在有一个公司推出专门的高GC含量的酶体系，可以用试试（TAKARA）.一般引物最好TM相差不大，感觉太大影响扩增效率
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生活活生生累死
6楼2016-10-13 21:43:04
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黄小萌萌

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为什么不自己设计引物
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7楼2016-10-14 08:40:02
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引物的话可以自己设计，高GC含量的话可以用GC buffer，或者加二甲基亚砜

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···
8楼2016-10-14 08:44:04
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弑者星魂

金虫 (正式写手)
巢式PCR可以吗

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9楼2016-10-15 23:36:57
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