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liumikewolf

金虫 (小有名气)

[交流] 质粒拷贝数与什么因素相关?

质粒拷贝数与什么因素相关?为什么pet28a的拷贝数那么低?
[search]pet28a[/search]
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liumikewolf

金虫 (小有名气)

拷贝数低到电泳几乎检测不到条带.通过什么方法能够增加质粒的量呢?
2楼2008-11-26 08:39:58
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humants

金虫 (正式写手)

★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论~
pet-28拷贝数很高啊,我前一阵还提了,
1.你可以划线复壮一下,挑一个菌落,再去提。
2.注意以下你的试剂,特别是溶液2,一定要新鲜,因为这一步决定了你的质粒到底能不能释放到溶液中。
3楼2008-11-26 09:10:57
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j2

木虫 (正式写手)

加的抗生素,菌是否新鲜,培养时间什么的
修炼ing,当虫仙……
4楼2008-11-26 10:01:28
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xipha

木虫 (正式写手)

用DH5a、XL1-Blue之类的宿主试试
5楼2008-11-26 10:40:32
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liumikewolf

金虫 (小有名气)

我是转化DH5a,挑选的单菌落提质粒.培养12h.就是菌浓偏低。需要再将液体培养划线挑单菌落,再提一次吗?
6楼2008-11-26 17:05:38
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bio830805

银虫 (小有名气)

一些小建议

★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论~
划线分离单菌落再培养,以前也出现过同样的问题,可能是DH5a保存时间太长了。我们常用JM109,提取质粒时注意菌体量不要过大,因为试剂盒的处理有限(以前遇到拷贝数低的情况就增加菌体量,后来发现效果反而不怎样),其它的条件按照试剂盒说明就行,试剂盒用国产的一般都可以了(听说进口的OMEGA的效果很好,用过一次,100次小量提取盒打折只要300元也不是很贵)。
另外以前还找过一篇关于测量质粒拷贝数的文献,题目是:

An Easy and Accurate Agarose Gel Assay for Quantitation of Bacterial Plasmid Copy Numbers
不会跳舞的外语达人不是好生物学家
7楼2008-11-26 17:51:12
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liumikewolf

金虫 (小有名气)

谢谢大家.我新买了top10做转化,提质粒结果还是这样,不过我再试一下划线
8楼2008-11-27 08:26:11
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liumikewolf

金虫 (小有名气)

划线挑单菌落培养,提质粒,还是没有条带.焦急!!!!
载体是pmd19 携带外源片段3.5kb,共6.1kb.  这是什么原因呢?!!!!!!
9楼2008-11-28 10:36:52
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