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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 有关双酶切问题，求助！！！
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黄小萌萌

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
以你目的基因的引物，做个PCR验证
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11楼2016-10-10 16:30:56
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顺利一生

新虫 (初入文坛)
确定目的条带有酶切位点，换用新的酶切buffer，酶切时间稍微加长例20分钟
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12楼2016-10-10 16:57:22
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周义杰

新虫 (初入文坛)
可以先做两次单酶切试试

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13楼2016-10-10 19:54:16
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ttszero

新虫 (小有名气)
你加了保护碱基么？

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14楼2016-10-11 22:03:09
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上官凤舞

新虫 (正式写手)
首先确定你的质粒为阳性，其次确定你的酶切体系步骤正确，最后测序鉴定

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15楼2016-10-11 22:57:51
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Nolan_童

新虫 (初入文坛)
先用通用引物测序验证有目的片段，再确定酶切时间是否足够以及试剂有没有问题，然后如果你的片段太小的话比如100多bp就可能跑胶的时候看不到

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16楼2016-10-11 23:22:52
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饺子弟

铜虫 (小有名气)
首先确定你的目标片段上有此酶切位点，在此基础上看双酶切是否可以同时进行在一个酶切体系中，还是需要分步酶切；酶切的温度、酶活、环境影响也要考虑一下。希望帮到你

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17楼2016-10-13 06:55:23
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你用的是什么的酶，国产的吗？
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采菊东篱下，悠然见南山。
18楼2016-10-13 08:09:49
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he-路路

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我之前也遇到过这个问题，换一下酶切体系试试
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.......
19楼2016-10-13 09:49:56
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