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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA变性聚丙烯酰胺电泳问题 求助
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xincer

木虫 (小有名气)

[求助] DNA变性聚丙烯酰胺电泳问题 求助 已有5人参与

为什么我跑20%的变性PAGE胶，加DNA样本的时候都沉不到孔底，一直飘在上面。。
我用7M的尿素变性。，救助啊。

@biostar2009 @wizardfan @飞约疯人院 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-09-24 11:33:24
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ylma雁过无痕

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kuaile5420: 金币+2, 欢迎发帖交流 2016-09-24 21:23:34
变性PAGE胶上样之前，一般都会用200 uL的移液器吹打胶孔，将胶孔残留的尿素吹出来，然后再上样。上样用的loading buffer一般用的是6X非变性PAGE胶所用的buffer加到饱和尿素溶液中，后续按照4Xbuffer来配制DNA上样溶液
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平静地度过每个钻研学术的日子
2楼2016-09-24 16:48:18
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坤啊兽

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
主要就是冲洗加样孔，尿素沉积很快的，而且预电泳中冲洗2-3次，加样中也要边冲洗边加样
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7楼2016-09-26 11:24:24
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普通回帖

xincer

木虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-25 10:25:10
引用回帖:
2楼: Originally posted by ylma雁过无痕 at 2016-09-24 16:48:18
变性PAGE胶上样之前，一般都会用200 uL的移液器吹打胶孔，将胶孔残留的尿素吹出来，然后再上样。上样用的loading buffer一般用的是6X非变性PAGE胶所用的buffer加到饱和尿素溶液中，后续按照4Xbuffer来配制DNA上样溶 ...

谢谢。也就是说上样前先将6*buffer用饱和尿素溶液稀释到4*吗？

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3楼2016-09-25 00:15:22
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yuy111

银虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-25 10:25:17
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2016-09-26 22:49:55
Best of wishes and good luck.
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4楼2016-09-25 01:15:10
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xincer

木虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-25 10:25:21
引用回帖:
4楼: Originally posted by yuy111 at 2016-09-25 01:15:10
Best of wishes and good luck.

Thanks

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5楼2016-09-25 09:04:59
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lxzk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-25 22:29:13
按二楼所说用移液器或者注射器冲洗上样孔，另外上样buffer用98%去离子甲酰胺加10mMEDTA和适量染料，作为1x(直接溶解乙醇沉淀DNA)或者2xloading buffer使用。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2016-09-25 19:25:27
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liugs

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
8楼2016-09-26 11:39:14
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hongbaojiang

新虫 (正式写手)
loading buffer加多少？

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9楼2016-09-26 14:55:20
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Swift1204

新虫 (小有名气)
是单链还是双链，加饱和尿素震荡加热再上样。

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10楼2016-09-26 18:00:02
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