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g0945111木虫 (小有名气)
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咨询怎么研究一个已知的基因看其是否转录、翻译 已有2人参与
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一个已知的基因，怎么追踪他是否转录了、然后翻译了，想评价这个基因的危害。 比如一个样品中检测到微生物有很多某个基因如抗性基因，似乎并不能说明其对人类是否有益或者有害，但如果我可以证明这个基因转录、翻译了，那我是可以比较明确的评价的危害的。 怎么做到呢？是需要我解析下一些抗药的蛋白或者酶的序列、反转录找到序列，然后找对应的DNA序列吗？但寻找到抗药的蛋白本身就是个比较复杂的过程，这个方法似乎不可取。到底该怎么做?求思路。。。。非常感谢@biostar2009 |
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didongwei
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【答案】应助回帖
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查看是否转录，提取RNA，反转录后做定量或半定量就行。至于是否翻译成蛋白质，可以提取蛋白，然后打质谱，或者做带标记的融合蛋白的转基因植株，然后查看标记蛋白是否表达来判断。 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2016-09-20 21:18:07
g0945111
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前边的这一步我基本是懂得，就是说我把RNA反转录之后得到的cDNA序列用转录之前的那个基因的引物做定量或者半定量就可以确定它是不是转录了。 后边这一步还是不太明白，我想看我转录的这一步RNA是否由他指导合成(翻译）蛋白质，打质谱出来的是分析这种蛋白质的结构吧，关键问题是我现在不知道他转录之后是否合成了蛋白质，我就不知道有没有这种蛋白质，该怎么解析这个RNA是否翻译成了蛋白呢？您的意思是所有的蛋白都解析结构，然后找个库比对，然后寻找到目标蛋白吗？后边您提到的这个带标记的融合蛋白就更不太清楚了，这是怎么样的一个操作，从哪一步开始标记。是把某个带标记的蛋白插入到我要研究的这个基因里边去，如果这个蛋白表达了就证明我的基因也表达了吗? 请您赐教，非常感谢您的回答。 |
3楼2016-09-21 10:05:43
didongwei
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提取蛋白后，跑胶，在相应大小的位置找是否有蛋白，然后打质谱，看是否与RNA翻译出来一一对应。另外一个是构建载体，将你研究基因的启动子，基因和标记蛋白连在一起做转基因，在转基因后代中看标记基因是否表达就可以啦 发自小木虫IOS客户端 |
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g09451114楼2016-09-21 19:01:38
g0945111
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