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雾里看花花开

金虫 (正式写手)

[求助] 在线急等!!!PCR大神! 已有6人参与

反应体系:50ul
MIX   45ul
引物上、下--各2ul(引物浓度10 uM)
模板质粒--1ul(质粒浓度 50 ng/ul)
PCR程序见图,温度梯度使用60,62,65度
结果见图
==============
请教过别人说是模板浓度太高,但是降低浓度之后也不见改善
引物是刚合成的,应该不会降解吧
现在担心是模板的问题,模板应该在3600b左右,最后一条带大概是在3000bp
急求!!!

在线急等!!!PCR大神!
PCR程序见图


在线急等!!!PCR大神!-1
结果见图---最后一个条带是模板,有点浅


在线急等!!!PCR大神!-2
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千里两句

新虫 (小有名气)

xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-04 13:10:19
或者加入GC enhancer

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3楼2016-09-03 16:56:08
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千里两句

新虫 (小有名气)

★ ★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-03 21:58:14
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-04 13:10:14
看看是否GC含量高,如果是这样的话可以考虑加入甘油或者DMSO

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2楼2016-09-03 16:55:41
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千里两句

新虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-04 13:10:24
我一般质粒模板加入的量仅仅是10ng

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4楼2016-09-03 16:58:23
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雾里看花花开

金虫 (正式写手)

xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-04 13:10:28
引用回帖:
2楼: Originally posted by 千里两句 at 2016-09-03 16:55:41
看看是否GC含量高,如果是这样的话可以考虑加入甘油或者DMSO

好的,马上试试

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我的一生最美好的场景就是遇见你
5楼2016-09-03 17:14:10
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