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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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bbyu007

木虫 (正式写手)

[交流] 【急】求助:我的PCR总是扩不出来~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~

这几天一直在做PCR,目的是扩水稻中某个基因的启动子序列。根据此基因前面2k序列设计引物,模板是水稻日本晴的全基因组DNA,但是一直扩不出来(检测时除了前面有引物二聚体带以外,什么都没有)!!!下午有做了不同退火温度的梯度试验,也是什么都没有!!!
体系是20ul:模板2ul,DNTP2ul,buffer(含mg+2)2ul,正反引物各0.5ul,Taq酶0.2ul,其它用水补齐。
请高手指点,我以前没有做过PCR,没经验~

[ Last edited by 350784478 on 2009-11-2 at 12:11 ]
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我是笨笨鱼~~~
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bbyu007

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 断弦的琴 at 2008-11-19 15:47:
看下引物的序列 是否正确。。。。

正在送往各个师兄处检查!!!!!!!
我是笨笨鱼~~~
7楼2008-11-19 17:01:00
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boouy

银虫 (正式写手)

深有同感啊,用pfu扩2.8kb的启动子没有进展。欢迎交流。
2楼2008-11-19 10:11:10
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bbyu007

木虫 (正式写手)

正在纯化模板~~~~~~~~~~~逐步排除吧,没办法的事情~~哎~~~
我是笨笨鱼~~~
3楼2008-11-19 10:25:12
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gxsulong

至尊木虫 (著名写手)

适当降低退火温度和延长延伸时间看看,再有你的模板不要反复冻融,最好把你近段时间要用到的量放在4度冰箱保存。我原来也有这方面的问题,现在基本解决了。祝好运。
霉菌
4楼2008-11-19 11:03:02
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