24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 810  |  回复: 10
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

bbyu007

木虫 (正式写手)

[交流] 【急】求助:我的PCR总是扩不出来~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~

这几天一直在做PCR,目的是扩水稻中某个基因的启动子序列。根据此基因前面2k序列设计引物,模板是水稻日本晴的全基因组DNA,但是一直扩不出来(检测时除了前面有引物二聚体带以外,什么都没有)!!!下午有做了不同退火温度的梯度试验,也是什么都没有!!!
体系是20ul:模板2ul,DNTP2ul,buffer(含mg+2)2ul,正反引物各0.5ul,Taq酶0.2ul,其它用水补齐。
请高手指点,我以前没有做过PCR,没经验~

[ Last edited by 350784478 on 2009-11-2 at 12:11 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

我是笨笨鱼~~~
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbyu007

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 断弦的琴 at 2008-11-19 15:47:
看下引物的序列 是否正确。。。。

正在送往各个师兄处检查!!!!!!!
我是笨笨鱼~~~
7楼2008-11-19 17:01:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

boouy

银虫 (正式写手)

深有同感啊,用pfu扩2.8kb的启动子没有进展。欢迎交流。
2楼2008-11-19 10:11:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbyu007

木虫 (正式写手)

正在纯化模板~~~~~~~~~~~逐步排除吧,没办法的事情~~哎~~~
我是笨笨鱼~~~
3楼2008-11-19 10:25:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gxsulong

至尊木虫 (著名写手)

适当降低退火温度和延长延伸时间看看,再有你的模板不要反复冻融,最好把你近段时间要用到的量放在4度冰箱保存。我原来也有这方面的问题,现在基本解决了。祝好运。
霉菌
4楼2008-11-19 11:03:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304材料求调剂 +4 钟llll 2026-03-26 4/200 2026-03-27 03:42 by wxiongid
[考研] 343求调剂 +4 赠我一本书 2026-03-23 4/200 2026-03-27 00:40 by wxiongid
[考研] 08开头275求调剂 +3 拉谁不重要 2026-03-26 3/150 2026-03-26 20:22 by barlinike
[考研] 生物学学硕,一志愿湖南大学,初试成绩338 +4 YYYYYNNNNN 2026-03-26 4/200 2026-03-26 19:00 by macy2011
[考研] 中国科学院深圳先进技术研究院-光纤传感课题组招生-中国科学院大学、深圳理工大学联培 +5 YangTyu1 2026-03-26 5/250 2026-03-26 18:27 by 猫咪猫咪呀
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +7 18419759900 2026-03-25 7/350 2026-03-26 16:07 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分,求调剂 +6 jiajunX 2026-03-22 6/300 2026-03-25 23:05 by licg0208
[考研] 299求调剂 +7 shxchem 2026-03-20 9/450 2026-03-25 10:41 by lbsjt
[考研] 318求调剂 +5 plum李子 2026-03-21 8/400 2026-03-25 09:26 by aa331100
[考研] 289材料与化工(085600)B区求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:20 by mx.yue
[考研] 材料学求调剂 +6 Stella_Yao 2026-03-20 6/300 2026-03-25 00:37 by baoball
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +7 vv迷 2026-03-22 7/350 2026-03-23 23:44 by Txy@872106
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 石河子大学(211、双一流)硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
信息提示
请填处理意见