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kaka369

新虫 (小有名气)

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专业: 植物病理学

[求助] 热硼酸法提取棉花根的RNA

各位虫子，

最近在提取棉花根的总RNA，用了热硼酸法提取。我想问一下，为什么我提取出来的RNA浓度好低？尽管质量还不错。但是后续本人想利用这些总RNA提取小RNA，需要的量很多（大约在200-400ug）。我用了大约100mg棉花根做了一个预实验，发现最后的产量只有3ug （理论上至少应该有20ug以上）。在提取的过程中我遇到了这么几个问题：

1. LiCl沉淀完成后，出现大量的黄色胶状物。这种现象正常吗？是不是RNA呢？
2. 利用2M的LiCl洗涤RNA沉淀的时候，是不是有大量的RNA会损失掉？如何避免？（因为我不继续往下做的时候，直接加水溶解去测浓度，尽管质量差，但是量很多大约30ug）;
3. 大家利用这种方法提取RNA的时候，是不是液氮研磨完成后，再利用beat beater继续匀浆？

请大家给点指点，我都提了好几次了，产量总是提不上来。谢谢啦~

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