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寒冰利剑金虫 (小有名气)
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[交流]
启动子PCR
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本人最近在克隆一个大小约2600bp的启动子，用的是NEB公司的phusion超保真酶，模板之前经过分段测序，有完整的序列，现在设计克隆全长启动子序列，测序发现中间部分序列存在较大程度与模板不匹配现象，启动子序列GC%平均在30%-40%，用phusion酶中的GC buffer，引物保证没有问题，不知道这是什么原因引起的，不知有没有虫友遇到过这种事情。有没有解决这种问题的方法，（到提供实用建议的，可追加金币，非诚勿扰） 发自小木虫Android客户端 |
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3楼2016-08-21 00:50:09
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-21 07:40:03
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-21 07:40:03
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也有可能本身启动子就和你下载的序列不一样 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-08-21 00:49:43
hanxiaominhu
至尊木虫 (著名写手)
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4楼2016-08-21 09:34:18
寒冰利剑
金虫 (小有名气)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-08-21 21:51:45
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-08-21 21:51:45
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模板不一样，但是同一种基因型的材料，分段克隆的序列都小于800bp，用的是一样的酶和反应体系，应该不会有错配。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-08-21 18:46:51