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贝壳989

新虫 (正式写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-08 08:26:43
先不做定量,不加引物试试

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53楼2016-08-07 21:48:24
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贝壳989

新虫 (正式写手)



xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-08 08:26:51
就是普通的PCR,做实验组,不加模板,不加模板和引物,

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54楼2016-08-07 21:49:33
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sammyliang

铜虫 (初入文坛)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-08 08:27:03
我曾经也受pcr污染的苦恼,后来p该基因的时候只能去另外一个实验室做,之前尝试过各种办法,包括移液器拆卸高压等均无果

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55楼2016-08-07 22:11:26
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zhangxf2014

新虫 (小有名气)


引用回帖:
55楼: Originally posted by sammyliang at 2016-08-07 22:11:26
我曾经也受pcr污染的苦恼,后来p该基因的时候只能去另外一个实验室做,之前尝试过各种办法,包括移液器拆卸高压等均无果

请问你之后解决没有?

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56楼2016-08-08 10:32:06
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zhangxf2014

新虫 (小有名气)


引用回帖:
54楼: Originally posted by 贝壳989 at 2016-08-07 21:49:33
就是普通的PCR,做实验组,不加模板,不加模板和引物,

不加模板和引物是什么意思呀?我们只做过不加模板的。不加引物应该没有东西吧

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57楼2016-08-08 10:34:48
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贝壳989

新虫 (正式写手)


58楼2016-08-08 11:29:11
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贝壳989

新虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
还有就是只加模板不加引物。找问题嘛,谁知道是什么原因。

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59楼2016-08-08 11:30:19
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zhangxf2014

新虫 (小有名气)


引用回帖:
59楼: Originally posted by 贝壳989 at 2016-08-08 11:30:19
还有就是只加模板不加引物。找问题嘛,谁知道是什么原因。

好的,之后上图

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60楼2016-08-08 12:17:58
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sammyliang

铜虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
56楼: Originally posted by zhangxf2014 at 2016-08-08 10:32:06
请问你之后解决没有?
...

该基因在我博士期间一直困扰,因为我之前做了这个基因的表达还有报告载体,污染很难消除

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61楼2016-08-08 12:36:01
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zhangxf2014

新虫 (小有名气)


引用回帖:
61楼: Originally posted by sammyliang at 2016-08-08 12:36:01
该基因在我博士期间一直困扰,因为我之前做了这个基因的表达还有报告载体,污染很难消除
...

好吧,且行且珍惜

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62楼2016-08-08 12:39:14
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free_zi

金虫 (著名写手)


63楼2016-08-08 12:42:39
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295249857

新虫 (初入文坛)



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楼主,你这应该是环境污染了!阴性对照ct值大于你的基因ct值5个ct以上,如果你的阴性对照35,目的基因30以内结果还是可信的。或者你可以实验室通风,或实验室消毒,或换个环境做。
64楼2016-08-08 14:44:57
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zhangxf2014

新虫 (小有名气)


引用回帖:
63楼: Originally posted by free_zi at 2016-08-08 12:42:39
换场所试试

换过几个不同的实验室,都没有用

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65楼2016-08-08 17:58:29
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zhangxf2014

新虫 (小有名气)


引用回帖:
64楼: Originally posted by 295249857 at 2016-08-08 14:44:57
楼主,你这应该是环境污染了!阴性对照ct值大于你的基因ct值5个ct以上,如果你的阴性对照35,目的基因30以内结果还是可信的。或者你可以实验室通风,或实验室消毒,或换个环境做。

换过不同的实验室了,结果还是一样。做的目的基因Ct和NTC都差不多

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66楼2016-08-08 18:00:41
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不爱做实验

银虫 (正式写手)



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送红花一朵
1、引物换个位置重新设计
2、可以考虑用灭菌水,换个机器来取水
3、最好换到很少有人做实验的房间
67楼2016-08-08 19:29:05
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zhangxf2014

新虫 (小有名气)


引用回帖:
67楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2016-08-08 19:29:05
1、引物换个位置重新设计
2、可以考虑用灭菌水,换个机器来取水
3、最好换到很少有人做实验的房间

1.引物有重新设计,但是效果不理想。
2.我们用的三蒸水都是灭菌之后才用,应该不会污染吧,也用过其他实验室的无菌水做过。
3.我们换过,还是不行。实在想不出是哪里出问题?

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68楼2016-08-08 22:19:15
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雨儿天0320

铜虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
测个序看是什么东西?
69楼2016-08-09 14:21:39
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不爱做实验

银虫 (正式写手)



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引用回帖:
68楼: Originally posted by zhangxf2014 at 2016-08-08 22:19:15
1.引物有重新设计,但是效果不理想。
2.我们用的三蒸水都是灭菌之后才用,应该不会污染吧,也用过其他实验室的无菌水做过。
3.我们换过,还是不行。实在想不出是哪里出问题?
...

好神奇啊。会不会你们空气中就有这基因啊。
我们这里总能炒鸡轻松的p出亮瞎眼的BT条带。
1、你干脆不用实验室的水,去远离你们地方的别处找点水
2、如果空气混有这基因,可行的话就再找其他地方
目前我实在不懂怎么办了,期待大神出现,哈哈
70楼2016-08-09 19:40:21
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zhangxf2014

新虫 (小有名气)


引用回帖:
69楼: Originally posted by 雨儿天0320 at 2016-08-09 14:21:39
测个序看是什么东西?

请问定量PCR产物可以直接克隆送去测序么??谢谢
71楼2016-08-17 21:54:58
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vege的桌子

铜虫 (小有名气)



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看溶解曲线了吗?阴性对照也是目的产物吗?你用染料法,引物二聚体也会有荧光产生的
72楼2016-08-30 17:31:06
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zhangxf2014

新虫 (小有名气)


引用回帖:
72楼: Originally posted by vege的桌子 at 2016-08-30 17:31:06
看溶解曲线了吗?阴性对照也是目的产物吗?你用染料法,引物二聚体也会有荧光产生的

NTC溶解曲线,Tm,Ct都和目的基因差不多

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73楼2016-08-31 08:07:31
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343551楼
2016-08-07 21:23   回复  
zhangxf2014(金币+1): 谢谢参与
lvluohua52楼
2016-08-07 21:27   回复  
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