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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 提取土壤DNA,DNA电泳有条带，就是PCR结果不出条带
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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静默人声412

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 提取土壤DNA,DNA电泳有条带，就是PCR结果不出条带 已有3人参与

用氨氧化细菌特异性引物，amoA_1F,amoA-2R,
扩增氨氧化细菌amoA基因，但是扩不出来，没有结果。
      我使用的宝生物的冷启动taq酶 ，每个反应体系加0.25ul酶，0.4ul引物，五个反应体系融合后，再分装，依据taq酶说明书设计的PCR反应过程，98，10s;55,30s,721min.40个循环。
哪位大神能帮我分析一下！
之前引物是每个2ul，引物二聚体过多，后稀释5倍。

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1楼 2016-08-04 11:18:32
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yuhan131481

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

土壤提取的DNA抑制物太多，建议：1、用DNA磁珠纯化下；2、可以试下NEB的 Q5或者Kapa hifi热启动酶，这两个酶耐受性比较强。谢谢
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9楼2016-08-08 17:42:43
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hanxiaominhu

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-07 14:53:36
退火温度和延伸时间是要看你用的引物的。其它主要看PCR酶。普通PCR的引物浓度大部分都是一致的，没记错的话差不多0.2uM。
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2楼2016-08-07 08:58:04
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取个什么名啊

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-07 14:53:42
土壤dna提取出来你纯化了吗？里面可能含有腐殖酸，会影响pcr。

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3楼2016-08-07 12:09:10
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独爱华尔兹

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-08-09 07:45:00
可能是DNA有问题：1.用专门提取土壤DNA的试剂盒提取DNA；2. DNA纯化；3. DNA在做PCR前稀释
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静默人声412
4楼2016-08-08 12:42:51
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