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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 5‘RACE求助
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怡轩小住

新虫 (初入文坛)

[求助] 5‘RACE求助 已有1人参与



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想通过5'RACE克隆抗体基因可变区，用clontech的试剂盒做的，测序结果看到有扩增到V区，但是V区的头没有扩到（已经排除mRNA降解的可能性）
我推测可能是UPM-short primer与V区某个部位发生了错配，以至于头部丢失（图中UPM-S序列的后五位碱基AGGGC恰好与V区扩增到的最开始的几个碱基因重合），但奇怪的是在测序结果中，UPM-S前面一段序列恰好与SMARTer II oligo一致，这就很奇怪了，按照正常情况，SMARTer II应该在UPM-S的后面不是吗？而如果按照我前面的推测，UPM-short错配的话，在测序结果中应该看不到SMARTer II的。

求高手赐教这到底是咋 回事儿？

5‘RACE求助
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1楼 2016-07-25 11:53:55
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
你这个问题确实很匪夷所思
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5楼2018-06-27 08:32:52
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杨柳依依625

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

前面的序列都是对的吗？会不会和其它基因错配了
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2楼2016-11-03 15:22:09
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bffgbgff

新虫 (小有名气)
你好，请问您的问题解决了吗？ 我做的RACE抗体测序是重链扩增不出条带，轻链可以扩增， 能不能告诉我一下您的GSP的引物序列？谢谢你！
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3楼2018-06-27 06:49:54
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
你这个问题确实很匪夷所思
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4楼2018-06-27 08:32:41
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