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5‘RACE求助 已有1人参与
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想通过5'RACE克隆抗体基因可变区，用clontech的试剂盒做的，测序结果看到有扩增到V区，但是V区的头没有扩到（已经排除mRNA降解的可能性） 我推测可能是UPM-short primer与V区某个部位发生了错配，以至于头部丢失（图中UPM-S序列的后五位碱基AGGGC恰好与V区扩增到的最开始的几个碱基因重合），但奇怪的是在测序结果中，UPM-S前面一段序列恰好与SMARTer II oligo一致，这就很奇怪了，按照正常情况，SMARTer II应该在UPM-S的后面不是吗？而如果按照我前面的推测，UPM-short错配的话，在测序结果中应该看不到SMARTer II的。 求高手赐教这到底是咋 回事儿？  图片1.png |
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