24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

houfuyuan

新虫 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 308.7
帖子: 76
在线: 80.6小时
虫号: 2427117
注册: 2013-04-20
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 载体构建已有3人参与

载体做PCR有目的条带，但是双酶切后的条带大小不同。

回复此楼

» 猜你喜欢

散金已经有68人回复
生物质超级电容器已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有130人回复
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析已经有0人回复
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点已经有0人回复
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点已经有0人回复
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？已经有0人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析已经有0人回复
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用已经有0人回复
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点已经有0人回复

玉无瑕，青春无华。

1楼 2016-07-23 21:17:27

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

不爱做实验

银虫 (正式写手)

应助: 37 (小学生)
金币: 316.7
红花: 5
帖子: 399
在线: 68.5小时
虫号: 3124215
注册: 2014-04-09
性别: GG
专业: 生物信息学

引用回帖:

7楼: Originally posted by houfuyuan at 2016-07-24 18:31:55
嗯，是的。在整个重组载体上我选择了三个酶，单切、两两双切、三切结果都显示确实插入了一个500的片段，只是目的基因两端的双酶切时只能看到4.7k，看不到500bp条带。我想再测序一下就更好了。是这样吧应该？...

其实一般只要菌液PCR鉴定到阳性克隆即可测序。
一般酶切鉴定，在目的片段里和载体上各选一个酶切位点，切出来两带即可，并且不要切的片段太小，不方便看。
那么按照你说的双酶切只有4.7k，那加上500bp不就是正好完整大小？！
说明是没问题，只是500bp条带太弱，不明显。
可以尝试加大酶切量，同时酶切时间一般2-3h即可，过久会切散。