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houfuyuan

新虫 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
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专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 载体构建已有3人参与

载体做PCR有目的条带，但是双酶切后的条带大小不同。

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玉无瑕，青春无华。

1楼 2016-07-23 21:17:27

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houfuyuan

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2016-07-24 15:04:08
一般情况下，电泳后，500bp的条带几乎不易看得到：
1、假设500bp条带被成功切下来，但是电泳后并未观察到。
那么，也就是实际你切出了4k、1k、500bp带。
说明载体上存在和目的片段两端相同的酶切位点。
...

嗯，是的。在整个重组载体上我选择了三个酶，单切、两两双切、三切结果都显示确实插入了一个500的片段，只是目的基因两端的双酶切时只能看到4.7k，看不到500bp条带。我想再测序一下就更好了。是这样吧应该？