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金虫 (正式写手)

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[交流] 预测膜蛋白的原核表达

最近，在做一个基因的功能验证。通过前期的实验发现，该基因有两个不同的isoforms，一个不含信号肽及跨膜域（P1），另外一个（P2）N端比P1对30个aa，含有信号肽同时N端含有跨膜结构域（1-5aa在胞内，6-29aa跨膜）。原核表达时（载体用的pET28a），P1能成功诱导出来为可溶形式，但P2无法诱导。在做诱导前，对P1做了截短实验，截短的片段无法诱导出目的蛋白。P2在预测的起始密码子下游15个核苷酸之后还存在一个起始密码子，目前，我担心是不是P2的起始密码子不对，所以无法诱导表达或者是不是真核生物中的膜蛋白在原核中本身就比较难表达呢？于此，想请教有经验的虫友指点一下，下一步该怎么做呢？谢谢。

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