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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 琼脂糖凝胶电泳突然变成带状，不明原因，求指教。
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neaushuai

木虫 (正式写手)

秦砖汉瓦
引用回帖:
9楼: Originally posted by shjsyl at 2016-07-07 21:20:02
有DNA酶污染，导致PCR产物弥散，注意水和PCR管的灭菌

用的是mix 水和pcr管均灭菌 是否模板与引物的比例1:5过大？

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为天地立心，为生民立命，为往圣继绝学，为万世开太平
21楼2016-07-09 22:13:21
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neaushuai

木虫 (正式写手)

秦砖汉瓦
内容已删除
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22楼2016-07-09 22:15:04
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zyn19931211

新虫 (初入文坛)
我也是这种情况，前几天还没问题呢，这几天就一片灰， 最近气温特别高，是模版降解了么？还是体系设计的不行啊？

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23楼2016-07-11 20:11:34
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flhua

木虫 (正式写手)

bachelordom

【答案】应助回帖

不特异，退火温度在提高一点试试吧
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只要有梦想，坚持就一定能实现
24楼2016-07-12 12:31:20
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neaushuai

木虫 (正式写手)

秦砖汉瓦
引用回帖:
24楼: Originally posted by flhua at 2016-07-12 12:31:20
不特异，退火温度在提高一点试试吧

好 我试试

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25楼2016-07-12 23:11:39
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neaushuai

木虫 (正式写手)

秦砖汉瓦
引用回帖:
23楼: Originally posted by zyn19931211 at 2016-07-11 20:11:34
我也是这种情况，前几天还没问题呢，这几天就一片灰， 最近气温特别高，是模版降解了么？还是体系设计的不行啊？

已解决，引物特异性差。调整后就可以了。

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26楼2016-07-12 23:13:10
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zyn19931211

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
26楼: Originally posted by neaushuai at 2016-07-12 23:13:10
已解决，引物特异性差。调整后就可以了。
...

换引物了啊？

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27楼2016-07-13 08:34:29
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长相思

银虫 (小有名气)
降解
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未来很美好
28楼2016-07-13 09:18:15
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NgAgo

新虫 (小有名气)
你确定是重复之前的实验吗？各试剂用量一样？单从图片看，你的maker本来就跑得不好看，胶没融好，还有可能就是你直接用pcr产物直接扩增，这样的模板浓度太高，要稀释才行。

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29楼2016-07-13 09:44:53
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neaushuai

木虫 (正式写手)

秦砖汉瓦
引用回帖:
27楼: Originally posted by zyn19931211 at 2016-07-13 08:34:29
换引物了啊？
...

是的 引物调整了两个碱基

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30楼2016-07-13 18:48:51
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