应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » GST亲和层析问题
51/1返回列表
查看: 2404  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

吾爱102

新虫 (小有名气)

[求助] GST亲和层析问题 已有1人参与

求各位高手指教！
我最近用GST亲和层析柱纯化一批可溶性表达的蛋白，用~20ml的10mM GSH，50mM Tris（PH 8.0）的洗脱液分10次洗脱，洗脱后的蛋白跑AKTA纯化，量特别少，盐酸胍处理GST柱时发现有大量蛋白被洗下来，想问一下，与谷胱甘肽有亲和作用的蛋白特征是什么，有没有可能我的蛋白沉淀在柱子上？对于这种情况有什么好的解决办法？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-06-30 21:04:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吾爱102

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2016-07-01 11:47:52
GST亲和介质特异性地纯化包含谷胱甘肽结合序列的非变性蛋白质，如谷胱甘肽-S-转移酶（GST）、谷胱甘肽过氧化物酶等。
处理有蛋白洗下来。就是目的蛋白没洗干净被。洗脱缓冲液中的GSH浓度加大洗脱，然后看结果在调整 ...

谢谢！我之前试过将洗脱液的PH降为6.9，这个PH跟我纯化蛋白的缓冲液的PH值一样，您说的将PH降到5.0是有什么道理？另外，我今天准备加大GSH的量到50mM试一下，非常感谢您的帮助！

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-07-01 14:36:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-04 07:24:01
GST亲和介质特异性地纯化包含谷胱甘肽结合序列的非变性蛋白质，如谷胱甘肽-S-转移酶（GST）、谷胱甘肽过氧化物酶等。
处理有蛋白洗下来。就是目的蛋白没洗干净被。洗脱缓冲液中的GSH浓度加大洗脱，然后看结果在调整，还不行，可以洗脱液的PH降低到5.0在试试。祝顺利。
赞一下 回复此楼
2楼2016-07-01 11:47:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 吾爱102 at 2016-07-01 14:36:50
谢谢！我之前试过将洗脱液的PH降为6.9，这个PH跟我纯化蛋白的缓冲液的PH值一样，您说的将PH降到5.0是有什么道理？另外，我今天准备加大GSH的量到50mM试一下，非常感谢您的帮助！
...

感觉加大谷胱甘肽的浓度会有效些吧，流速也要慢些。另外我个人感觉ph如果差别太大会不会使蛋白变性而不溶。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-07-04 01:09:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吾爱102

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 凯伦爱佳佳 at 2016-07-04 01:09:59
感觉加大谷胱甘肽的浓度会有效些吧，流速也要慢些。另外我个人感觉ph如果差别太大会不会使蛋白变性而不溶。
...

确实加大GSH的浓度后洗脱的蛋白量有所增加，感谢！

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-07-04 14:53:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +3 wangyl_123 2026-10-10 6/300 2026-10-11 15:04 by Abin0406
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 5/250 2026-10-11 09:00 by 好运来～9527
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +5 13108017953 2026-10-08 5/250 2026-10-10 11:15 by wdwd123
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭