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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 科学小覃 at 2016-06-30 17:12:12
pMD18T载体本身就有EcoR I位点,如果你的插入片段也有相同的位点,那单酶切产生两条带就不奇怪了。...

以前没出现这样的现象,那我回收的片段还是可以用的吗?

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11楼2016-06-30 17:45:26
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爱一生恋一世

银虫 (小有名气)

任何事情只有靠自己
12楼2016-07-01 00:06:26
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这是T载体上本身有EcoR1的酶切位点,再加上你连接的方向是与T载体上的EcoR1反向的结果造成的
路漫漫其修远兮,吾将上下而求索
13楼2016-07-01 09:43:42
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cheerymary

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
另外一个酶的酶切位点相距EcoR I位点多远,如果相距近的话,切出来的小片段很快就跑出去了,电泳上当然显示不出条带,再加上你的载体和目的片段都有EcoR I位点的话,单双酶切跑胶图一样也就不奇怪了
14楼2016-07-01 09:54:46
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
14楼: Originally posted by cheerymary at 2016-07-01 09:54:46
另外一个酶的酶切位点相距EcoR I位点多远,如果相距近的话,切出来的小片段很快就跑出去了,电泳上当然显示不出条带,再加上你的载体和目的片段都有EcoR I位点的话,单双酶切跑胶图一样也就不奇怪了

我还是理解不了

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15楼2016-07-01 11:16:38
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匿名

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16楼2016-07-01 23:03:16
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 弦山小栗 at 2016-07-01 23:03:16
可能是有双酶切微点,建议先查下自己的序列

我基因的酶切位点没有问题

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17楼2016-07-02 00:22:25
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匿名

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18楼2016-07-02 05:15:36
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 弦山小栗 at 2016-07-02 05:15:36
可能发生突变了呢,要不先测序
...

没有啊

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19楼2016-07-05 22:54:37
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 游侠892 at 2016-07-01 09:43:42
这是T载体上本身有EcoR1的酶切位点,再加上你连接的方向是与T载体上的EcoR1反向的结果造成的

我这个目的片段能用吗

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20楼2016-07-05 22:55:03
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