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tw1123581321

金虫 (小有名气)

[求助] DH5a发酵罐表达 已有1人参与

用DH5a表达一个蛋白,原始用2yt,然后换了半合成培养基:甘油,蛋白胨,酵母粉,磷酸盐,硫酸镁,微量元素等,在摇瓶水平上表达优于2yt
目前做发酵罐,底料同摇瓶,补料培养基:甘油,蛋白胨,酵母粉等。
具体流程:37度接种培养保持DO大于20,至DO大于80后,按μ0.2的速度指数流加6小时,1mMIPTG诱导,同时流加速度变为μ0.05,37度表达4小时,干重仅为15,表达量仅为摇瓶水平的1/3-1/4
请教
1怎样提高表达量?
2DH5a一般能做到多大密度?用什么样的流加方式?

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star013

新虫 (知名作家)


5楼2016-06-27 09:59:38
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梅太奇阿拉干

木虫 (小有名气)

DH5a是克隆菌柱,表达一般用BL21

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2楼2016-06-25 23:11:24
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六六六六六

新虫 (小有名气)

我也是想这样问,DH5a是克隆菌株啊,楼主,你是不是搞错了宿主名称

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3楼2016-06-26 09:49:15
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tw1123581321

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 梅太奇阿拉干 at 2016-06-25 23:11:24
DH5a是克隆菌柱,表达一般用BL21

绝对没有,目前这个蛋白就是用DH5a表达的,领导不同意换菌种,

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4楼2016-06-26 13:36:00
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