| 查看: 1688 | 回复: 9 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
凯伦爱佳佳金虫 (正式写手)
|
[求助]
就是纯化不出来 已有4人参与
|
||
|
包涵体蛋白。 透析之前检测有条带，透析之后检测有条带，过柱子之后检测无条带，证明蛋白已经挂在了GST柱子上。 用elution buf+谷胱甘肽 洗脱，检测，什么都没有？？？？？没洗掉？浓度低？ 往后想做western，蛋白搞不出来，好急啊 |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有4人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有5人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有5人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有7人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有8人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有11人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 配体纯化后单晶长不出来了，求助！
已经有2人回复
- His- tag纯化蛋白，柱子挂不上的问题
已经有6人回复
- NI柱纯化，杂质挥之不去
已经有3人回复
- 乳酸乳球菌代谢产物的分离纯化求助
已经有12人回复
- 亲和层析纯化血清中的特异性抗体挂不上柱怎么办
已经有1人回复
- 制备液相分离纯化样品溶解问题
已经有13人回复
- 镍柱纯化酶挂不上柱子
已经有2人回复
- 求助酶的镍柱纯化
已经有8人回复
- 关于重组表达纯化出的蛋白的酶活性问题
已经有9人回复
- 蛋白易降解应该如何纯化
已经有14人回复
- 求助！如何把淀粉酶产生菌（目标细菌）从杂菌中分离纯化出来？
已经有2人回复
- 粘稠季铵盐 纯化
已经有10人回复
- 怎么纯化啊？急
已经有4人回复
- 糖的纯化
已经有2人回复
- 请帮忙推荐下蛋白电泳装置， 或洒点蛋白纯化 or PAGE 经验啊！
已经有8人回复
- GST融合蛋白纯化求助 ！！！
已经有19人回复
- 【原创】原创之六：环境样品总DNA的提取与纯化【已搜索无重复】
已经有178人回复
- 【分享】蛋白质纯化个人总结2
已经有38人回复
20081118129
新虫 (著名写手)
Drake
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 7811.3
- 散金: 5309
- 红花: 5
- 帖子: 2448
- 在线: 163.4小时
- 虫号: 1114743
- 注册: 2010-10-06
- 性别: GG
- 专业: 细胞周期与调控
9楼2016-06-24 20:26:00
hc-material
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +702 - BioEPI: 1
- 应助: 517 (博士)
- 金币: 467.7
- 散金: 18028
- 红花: 313
- 帖子: 3594
- 在线: 518.9小时
- 虫号: 4027804
- 注册: 2015-08-18
- 性别: GG
- 专业: 核技术及其应用
- 管辖: 生物科学
2楼2016-06-20 10:58:50
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
蛋白纯化没有蛋白几点原因分析： （1） 超声功率不对 太大 蛋白炭化 太小 蛋白没有完全释放；策略改变超声功率 超声前加入溶菌酶； （2）样品或者是结合缓冲液不正确 策略：检测 pH 及样品和结合缓冲液的组成份（EDTA）。 （3）组氨酸的标签没有完全的暴露 策略：在变性条件下(用 8M 脲，6M 盐酸胍,1%SDS) 并加入 1-2mMDTT 进行纯化。 （4）His 标签丢失,策略 1：WB 或者 anti-his 的抗体检查 His 是否表达，上游构建，改变his-tag 的位(C-terminal or N-terminal)，必要时增加 his 个数(常用 6-10 个)。 策略 2：孵育的时间不够，降低流速和增加孵育的时间。 策略 3：改变螯合的金属离子，寻找到最佳的结合金属离子。 更多蛋白纯化问题可见：蛋白纯化系统专题 Ni2+通常是从宿主细胞蛋白中纯化大多数(组氨酸)6 标记的重组蛋白质的首选金属离子，也是一般最常用的离子。蛋白和金属离子之间的结合强度受几种因素影响，包括长度、位置、亲和标记在蛋白的暴露程度、所用离子的类型、以及缓冲液的 pH，因此一些蛋白用其他离子可能更容易地进行纯化而不用 Ni2+。可以利用 Hitrap IMACHP 来筛选不同的金属离子， |
3楼2016-06-20 16:56:50
凯伦爱佳佳
金虫 (正式写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 1571.1
- 散金: 97
- 红花: 1
- 帖子: 321
- 在线: 75.5小时
- 虫号: 3487227
- 注册: 2014-10-20
- 性别: GG
- 专业: 水产生物免疫学与病害控制
4楼2016-06-20 17:29:10
