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wangxu1017

银虫 (初入文坛)

[求助] 基因组未知基因验证 已有3人参与

各位大虾:
本人通过二代测序获得一株食品中分离的单增李斯特菌(食源性致病菌,革兰氏阳性菌)基因组,通过比较基因组比对发现3个基因组岛含有假定蛋白并没有在其他细菌中发现,请问如何鉴定这个基因?是否要进行蛋白质组学确定有基因功能,或者更简便的方法确定其有蛋白质功能,还是直接进行敲除实验?谢谢
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超越自我i
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wangxu1017: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-06-06 15:07:09
通常的思维逻辑是这样的,分子生物学上通常是,参考比对序列同源性较高的已知序列,推测酶功能,也就是你做的基因组比对,接下来从两个大方面可以进行,一个是体内验证,也就是你说的基因敲除,当然还有敲除后的基因回补,这可以在原始菌株内验证其真实功能;另一个是体外验证,即做异源表达来纯化获得该基因的蛋白,在体外进行蛋白功能研究。最后其他学科方向都会有不同的研究方式,蛋白组学,生物信息学,生物转化等等,对于没有思路的,个人觉得参考现有的相似蛋白研究成果是必要的,祝好!!

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2016-06-05 08:17:09
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wangxu1017

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-06-05 08:17:09
通常的思维逻辑是这样的,分子生物学上通常是,参考比对序列同源性较高的已知序列,推测酶功能,也就是你做的基因组比对,接下来从两个大方面可以进行,一个是体内验证,也就是你说的基因敲除,当然还有敲除后的基因 ...

谢谢,是不是参照现有蛋白可以在NCBI或者其他类似网站比对寻找?那么如果这些未知蛋白是假定的,没有比对结果,那只有凭运气咯。

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超越自我i
3楼2016-06-05 10:11:29
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nanhu1984

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

没有捷径,只能通过常规分子生物学方法验证蛋白质功能
https://www.microbialgenomic.cn/
4楼2016-06-25 23:34:56
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


重组蛋白体外功能表征,或者直接敲除,也可以体内过表达

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5楼2016-06-26 20:58:18
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leonscu

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-06-05 08:17:09
通常的思维逻辑是这样的,分子生物学上通常是,参考比对序列同源性较高的已知序列,推测酶功能,也就是你做的基因组比对,接下来从两个大方面可以进行,一个是体内验证,也就是你说的基因敲除,当然还有敲除后的基因 ...

您好,可以线下交流一下技术问题吗?
lessismore.
6楼2017-05-09 14:04:30
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二十一业

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1、可能是基因组注释的原因,测序公司所用的数据库或者方法没能将该基因的功能注释出来,可先自己再确认一下该蛋白是否确定未知功能。
2、可能是未被研究清楚的基因,利用实验方法,如楼上所说的敲除回补实验结合表型判断或者别的试验方法判断。
7楼2017-05-10 10:32:50
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