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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » GFP融合蛋白，能看到荧光，但western blot检测不到
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zhlq_mail

铜虫 (小有名气)
跑胶染色有目的条带吗？

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11楼2016-06-09 04:20:29
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armigera

金虫 (正式写手)
★
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flag的序列能p出来么

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12楼2016-06-09 09:58:49
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liuxinyueer

木虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by zhlq_mail at 2016-06-09 04:20:29
跑胶染色有目的条带吗？

跑完胶染色，如何确定目的条带
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13楼2016-06-09 15:02:13
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liuxinyueer

木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by armigera at 2016-06-09 09:58:49
flag的序列能p出来么

可以
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14楼2016-06-09 15:02:24
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armigera

金虫 (正式写手)
★
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是不是这个目的蛋白上有酶切位点，可以被切下来行使功能或者被ubiquiting降解？别的原因暂时没想到

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15楼2016-06-09 15:14:13
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liuxinyueer

木虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by armigera at 2016-06-09 15:14:13
是不是这个目的蛋白上有酶切位点，可以被切下来行使功能或者被ubiquiting降解？别的原因暂时没想到

泛素降解的话，就什么都检测不到吗?
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16楼2016-06-09 16:58:51
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armigera

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
水平有限，这个问题回答不了。抱歉～

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17楼2016-06-09 17:28:22
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zhlq_mail

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by zhlq_mail at 2016-06-09 04:20:29
跑胶染色有目的条带吗？

1,算出蛋白大小，蛋白marker比对一下，2western，3纯化或切割条带打质谱。

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18楼2016-06-10 12:33:41
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nomy

新虫 (小有名气)
★
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1建议你上research gate网站上看一眼，我感觉前几天我刚看了一个检测gfp融合蛋白的，
2你可以试试用gfp抗体能不能检测。
3是不是目的蛋白flag检测位点被什么东西cover了，虽然sds一般都是变性的，但是也存在不完全变性或者部分复性导致epitope被隐藏，然后进一步导致检测不到
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19楼2016-06-10 17:21:27
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liuxinyueer

木虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by nomy at 2016-06-10 17:21:27
1建议你上research gate网站上看一眼，我感觉前几天我刚看了一个检测gfp融合蛋白的，
2你可以试试用gfp抗体能不能检测。
3是不是目的蛋白flag检测位点被什么东西cover了，虽然sds一般都是变性的，但是也存在不完全 ...

GFP能检测到。其实这个融合蛋白是含2A site 的，GFP和目的蛋白由2A site连着，细胞内有2Asite的酶，会将这两个蛋白切断。
其实这个蛋白是我做慢病毒载体稳转到细胞中的，而且在稳转前我做过瞬转，瞬转能检测到此蛋白。
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20楼2016-06-10 22:09:20
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