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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[交流] 蛋白质纯化已有6人参与

亲们,有木有做过蛋白质纯化的呀。我包涵体用曲拉通、脲变性、透析过之后,总有白色物质析出,有木有影响啊?
我的透析袋是14000的,目的蛋白50000的。
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

其实我的上清里面也有目的蛋白条带,只是我收集上清过柱子纯化后,跑胶什么都没有了?
这是什么愿意呢?含量太低了?
19楼2016-06-15 12:18:56
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
21楼: Originally posted by baima at 2016-06-16 08:27:36
还有就是,你透析时间是不是太长了。正常情况下两个小时透析袋内外会达到平衡,我们一般4小时换一次透析液 ,透析要低温搅拌进行。制备蛋白的时候时间太久的话,也有可能析出来。
...

我长短时间都试过,结果一样。
现在我在试梯度透析,目前来看效果还不错
23楼2016-06-16 13:09:31
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
20楼: Originally posted by baima at 2016-06-16 08:21:30
很有可能啊,梯度跨度太大了。过完镍柱的洗脱峰,我用梯度透析,成功率还是很高的
...

你是先过的柱子,再透析的哦。
我是先透析,再过柱子。
24楼2016-06-16 13:11:29
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
25楼: Originally posted by baima at 2016-06-16 13:35:13
嗯嗯,是的,纯化试剂我用的都是含变性剂的~~是不是你的柱子不耐受尿素?
...

我用的是GST柱子。说明书上也没有写这个东西,哎
27楼2016-06-16 14:03:30
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