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ahooxmc

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE M形 鬼带原因是什么已有1人参与

最近做SDS-PAGE(好久没有做过了),样品是原核表达的蛋白上清液(超滤管浓缩,并除盐)和菌体超声破碎后上清液(超滤管浓缩,并除盐),15% 分离胶。 电泳结果显示菌体破碎蛋白最前端的蛋白(小分子的)都呈现M形条带,邻近的上清蛋白及Marker 都相对正常? 有人遇到这种情况不,神马原因?

SDS-PAGE M形 鬼带原因是什么
M shaped.jpg
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superwenli

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
凝胶不均匀,漏胶了么?

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8楼2016-05-27 20:31:38
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lmqml24

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

2楼2016-05-25 13:49:08
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wenda2015

新虫 (初入文坛)

融合蛋白一般不会太小,没必要用15%的胶,10%和12%足以;上样量减小,点样前再煮一下样品试试

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7楼2016-05-27 19:57:31
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jiangronglu

铁杆木虫 (著名写手)

分离胶太短,浓缩胶浓度好了,另外上样时菌体需要处理,可以煮沸10min,如果很稠的话可以采用离心,取上清上样,顺便控制上样量,12000转离心10min后上就OK了

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努力就有收获,人人都能成功
9楼2016-05-28 07:38:28
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沉默、颜泪

木虫 (正式写手)

首先,Marker条带挺好,胶配置比较均匀。其次,你的样品量太高!但是,一般来说,样品量过高,影响蛋白的分离效果(分不开)。你这样的情况,真第一次见!我个人认为:应该是小分子蛋白的原因,一,浓度实在太高;二,变性剂加少了或者煮沸变性不充分,三、该条带的蛋白自身有问题。祝好运!

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10楼2016-05-29 00:59:04
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普通回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

3楼2016-05-25 14:19:17
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stabilized

银虫 (小有名气)

胶太浓了,低一点试试。另外配胶时仔细点,可能有点不均匀?

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坚持!
4楼2016-05-25 15:07:41
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xiangwebber

新虫 (初入文坛)

土豪,这么多样本不心疼啊。。。

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5楼2016-05-26 18:25:41
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

上样量过大;或者胶凝固过快,没配置好

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I am not a hero , but I served with heroes!
6楼2016-05-27 11:41:00
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