24小时热门版块排行榜    

查看: 6089  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

六界玄灵

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 绝对定量PCR标准曲线绘制问题 已有1人参与

刚开始做功能基因的绝对定量,目的基因确定导入质粒中,也经过普通PCR验证过,扩增没有杂带,扩增曲线还可以,但是熔解曲线不知道是什么情况,后期做的一次扩增曲线比上图还要好,熔解曲线前一部分没有任何杂峰,最后出现的峰图不知道什么意思,请大神不吝赐教!谢谢啦

绝对定量PCR标准曲线绘制问题
捕获1.PNG


绝对定量PCR标准曲线绘制问题-1
捕获.PNG@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

溶解曲线出现双峰表示扩增特异性不好,可能是引物设计存在问题我觉得一般引物设计时特异性没有问题,只是理论,关键要看实践。我觉得你可以尝试提高退火温度,但是这样可能会导致CT值略晚出现,我师姐他们实验室用BIOGHC ELITEFAST SYBR KIT扩增GAPDH基因的一个片段,他们当时也出现了溶解曲线有双峰,通过提高退火温度来调整优化实验条件
4楼2019-03-25 13:41:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

qx4117

银虫 (小有名气)

楼主的扩增曲线很漂亮,不知道楼主做的是不是DNA的绝对定量?我也做功能基因的定量,但是梯度稀释的质粒,Ct值都很接近啊,想问一下楼主质粒浓度是多少,稀释的梯度又是多少,不胜感激。
2楼2018-01-03 15:47:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +33 医学老男孩 2026-08-13 80/4000 2026-08-17 14:40 by yq199112088
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +3 angus9576 2026-08-17 6/300 2026-08-17 14:32 by 启萌科技
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 6/300 2026-08-17 13:58 by EYK67XJMj64E
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +7 wangze12014 2026-08-14 8/400 2026-08-17 12:45 by a441914426
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 i7NFEVbjQMM5 2026-08-16 4/200 2026-08-17 12:10 by 4GBAYCdVQoK3
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
信息提示
请填处理意见