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18862141107

新虫 (初入文坛)

Takara的BamHI和HindIII双酶切我们也经常用,我个人是0.5ul的,一直正常,其他人也有用1和1.5的,也没问题
11楼2016-05-19 18:54:43
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sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 18862141107 at 2016-05-19 18:54:43
Takara的BamHI和HindIII双酶切我们也经常用,我个人是0.5ul的,一直正常,其他人也有用1和1.5的,也没问题

我是用10×K buffer,因为HindIII效率低一些,所以都用双倍
你的日子如何,你的力量也必如何!
12楼2016-05-20 10:15:05
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啄木鸟HXH

新虫 (初入文坛)

你好,我现在也碰到类似问题,我是空pet-32a直接转DH5a怎么都不长阳性克隆,能向你请教相关问题嘛?
13楼2016-06-25 23:09:20
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sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 啄木鸟HXH at 2016-06-25 23:09:20
你好,我现在也碰到类似问题,我是空pet-32a直接转DH5a怎么都不长阳性克隆,能向你请教相关问题嘛?

不好意思前段时间电脑坏了,空转都没有阳性的话,首先确认质粒有没有问题,然后是感受态细胞可以重新制备试试
你的日子如何,你的力量也必如何!
14楼2016-07-04 16:54:22
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我只回答一下8的问题,摇了6h的时候OD才到0.6,会不会是菌种在传代过程中活性降低,要不试试提质粒重新转入表达菌株,我的也遇到过类似的情况

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想做个有趣的人,却在逗比的道路上越走越远~
15楼2016-07-04 18:19:57
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pjxiongjing

新虫 (小有名气)

请问你蛋白表达之后,后期要纯化么

发自小木虫Android客户端
16楼2016-09-01 22:45:40
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sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by pjxiongjing at 2016-09-01 22:45:40
请问你蛋白表达之后,后期要纯化么

后期不做纯化了,超声破碎上清直接用

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你的日子如何,你的力量也必如何!
17楼2016-12-21 08:41:45
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sxxuan

金虫 (著名写手)

送红花一朵
引用回帖:
15楼: Originally posted by 曼陀罗的祈祷 at 2016-07-04 18:19:57
我只回答一下8的问题,摇了6h的时候OD才到0.6,会不会是菌种在传代过程中活性降低,要不试试提质粒重新转入表达菌株,我的也遇到过类似的情况

我们后来做了实验发现是感受态有问题,od0.2就诱导可以恢复正常表达浓度

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你的日子如何,你的力量也必如何!
18楼2016-12-21 08:42:40
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尹俊采

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by sxxuan at 2016-05-19 09:36:42
我试过普通双酶切2h,纯化后直接1ul转化感受态细胞,也长菌了是否代表没有完全酶切?
连接体系20ul,一般拿10ul去转化,然后全部菌拿去涂板,是否太多?但长出来的菌落也不是很多。...

长菌是肯定有没切好的质粒,把空质粒转进去了

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19楼2019-06-28 17:35:23
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