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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物做酶切
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数到三咱就撤

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物做酶切 已有2人参与

PCR产物片段大小是745bp，要做的是通过酶切分基因型，不同的酶切结果对应不同的基因型。酶切后共有三种基因型，第一种是酶切后两条带，528和217；第二种是三条带，745，528和217；第三种是一条带，745。现在酶切结果最多的时候能出现五条带，分别在1000左右、745、528、500左右、217。用的酶是thermo的Apa I.PCR体系是15微升，之后直接加0.5微升的酶和1微升的buffer,酶切3小时。哪位大神能赐教一下这是怎么个情况？之前做的都没有出现这种情况，酶切之后条带怎么会变大呢？？

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1楼 2016-05-09 16:28:15
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wodejiapple

铜虫 (正式写手)
是不是因为聚合酶在酶切条件下仍在进行非特异性扩增

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9楼2016-05-12 08:47:13
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能PCR产物不纯。
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2楼2016-05-09 16:38:10
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数到三咱就撤

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-05-09 16:38:10
有可能PCR产物不纯。

我做过PCR产物直接跑胶，条带是单一的。

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3楼2016-05-09 17:56:21
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
那就不知道了，很诡异的结果。
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4楼2016-05-09 18:20:34
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