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博克侬浮码银虫 (小有名气)
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双酶切切不开 已有1人参与
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| 做双酶切，用的NEB的Bgl II和Nsil ，两种酶都是同一种buffer3.1，但是为啥死活切不开，双酶切体系20ul与50ul的都试过了，实在找不出原因。 |
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2楼2016-05-05 18:24:22
sunguangchao
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15楼2016-05-10 05:22:03
atlanticwi
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1）如果你拿过来能切开，转大肠杆菌后再提质粒，切不开，问题肯定在你这边。两种酶不存在甲基化影响，也就是你转什么类型的宿主大肠杆菌应该都没问题。所以只有一点，她给你的质粒不纯，你提质粒的那个单菌落就是不对的。要质粒的同时要图谱是必须要做的事情。尤其是自己转化的这种，必须用多对酶切组合，证明质粒是对的。 2）没有在NEB的说明书上看到这两个酶有什么问题。你非要用的话，建议做两个实验（先证明你的质粒是对的） 其一，先加入一个酶酶切后，保证酶切完全的时间即可，失活第一个酶，再加入第二个酶（直接加酶，因为Buffer一样），酶切完全的时间反应后，看结果。 其二，先加入一个酶酶切后，保证酶切完全的时间即可，PCR纯化柱回收DNA后，重新加第二个酶的反应体系作反应。看结果。 |
17楼2016-05-10 23:11:01
3楼2016-05-05 23:49:30
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4楼2016-05-05 23:57:16
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-05-10 08:52:57
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5楼2016-05-05 23:58:27
Cathering_w
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